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【求助】MCF-7总往起漂,是什么原因?

最后编辑于 2022-10-09 · IP 美国美国
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这个帖子发布于 14 年零 158 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
刚养MCF-7,形态跟ATCC给的图片差不多,成片状生长,分泌物比较多,看上去比较脏。1:3传代大概4-5天一代(这个不太确定,细胞复苏后刚传过一代,今天是传代后第四天,估计晚上可以达到80%融合)。培养基条件:MEM,NEAA,丙酮酸钠,人重组胰岛素(ATCC上用的猪胰岛素,卖我们细胞的细胞库用的人胰岛素),10%胎牛血清。传代条件:25cm 培养瓶,胰酶润洗过细胞后,1ml 0.05%胰酶-0.02%EDTA,37度,大概1分半,8倍含血清培养基中和,反复吹打,再加入7ml含血清培养基,入75cm培养瓶培养(我这里的操作规程就是不论胰酶还是DMSO,都不离心除去,直到细胞贴壁后才换培养基除去。)。

唯一的问题就是总有少量细胞漂浮,换液后培养基很干净,第二天就有少量细胞漂起来,第三天还有,但是未感觉漂浮的细胞数量较前一天增加。按照ATCC的说明,这个细胞的doubling time应该是29小时,那么按1:3传代大概2天就可以长满,但是我现在已经4天了,我觉得是因为细胞漂浮所以长的慢。

我觉得我的操作有两点比较有问题:一是消化时间短,吹打的比较厉害(但之前有的帖子说应该这个做),二是我很意外的使用了一个BD的塑料培养瓶,我之前都是用corning的,不知道BD的瓶子会不会影响贴壁。

搜索以前的帖子,有人说这个细胞就是爱往起漂。请养过这个细胞的版友说说养这个细胞的经验吧,如何避免细胞往起漂?我第一次养这个细胞,这么总往起漂影响以后的进度,谢谢!





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