【膜片钳】大家进来帮我看看我切的脑片出了什么问题？

我刚刚接触脑片膜片钳，可是每次脑片切完孵育后，利用红外微分干涉相差显微镜下观察，细胞总是死亡，大家帮我分析分析原因吧，看看哪个环节出了问题，谢谢大家啊！
我的实验步骤如下：
品。
1. 配液
人工脑脊液ACSF配方（mM）（pH值7.4）
  分子量  配比（mM）  质量g/L  
NaCl  58.44  126  7.3634  14.7268
KCl  74.56  5  0.3728  0.7456
MgSO4•7H2O  246.47  2  0.4929  
CaCl2  110.98  2  0.2220  0.4440
NaHCO3  84.01  25  2.1003  4.2006
NaH2PO4•2H2O  156.01  1.5  0.2340  
Glucose•H2O  198.17  10  1.9817  

低钙人工脑脊液配方（mM）（pH值7.4）
  分子量  配比（mM）  质量g/L
NaCl  58.44  126  7.3634
KCl  74.56  5  0.3728
MgSO4•7H2O  246.47  2  0.4929
CaCl2  110.98  0.2  0.0222
NaHCO3  84.01  25  2.1003
NaH2PO4•2H2O  156.01  1.5  0.2340
Glucose•H2O  198.17  10  1.9817

2. 饱和溶液
95% O2+5%CO2充分饱和上述两种溶液，持续约0.5 h。
3. 取6天SD大鼠，麻醉（10%水合氯醛：3ml/kg）
4. 断头取脑， 脑组织至于半冰晶状态低钙人工脑脊液中1~2min，然后按实验需要切割脑组织。（从断头到将脑时间＜1min）。
5. 利用502胶水，将切好脑组织至于盛有ACSF的震荡切片机的平台上，水槽中盛有ACSF，持续通入95% O2+5%CO2。震荡切片机切片，速度4~5档，片厚350μm。
6. 孵育脑片 将切好脑片转移到盛有ACSF的烧杯中，孵育1~2 h，ACSF中持续通入95% O2+5%CO2。
7. 将脑片转移到浴槽中，利用红外微分干涉相差显微镜观察。