【求助】脑缺血大鼠模型的Evans Blue 染色

我是做血脑屏障的通透性的，步骤是先做MCAO模型，缺血90分钟。于缺血后4h鼠尾静脉注入4%EB0.75ml，24h后处死提脑。没有看见脑组织有蓝染。
我也做过处死前2h 和1h 注射EB，但只有一次在基底节区看见蓝染，其余全没有染色。
EB是用生理盐水稀释的。
中文文献上只有数据，没有一个是把脑冠状切面图贴上的，我怀疑他们是不是真的做出来了。
有哪位前辈做出来过，请不吝赐教。