【求助】关于PBMC提取，紧急求助！
发布于 2010-09-21 · 浏览 3.4 万 · IP 湖南湖南
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现在在医院里做实验，提了两次PBMC都失败了，正常应该是第一层血浆，第二层即为PBMC，第三层为分离液，第四层为红细胞。可我离心完以后PBMC出现在分离液和红细胞的交界面，并不是在分离液的上面。
实验操作如下：1、在离心管中加入与血液等量的淋巴细胞分离液。
2、取抗凝血与等量Hanks液充分混匀，用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上，水平离心2000rpm×20分钟。离心完就是上述结果
而且在将血液往淋巴细胞分离液上加时，即使很小心血液也会往淋巴细胞分离液里渗入。而且随着时间越渗越厉害。是不是淋巴细胞分离液的问题？（分离液购于中科院）
现在用的Hanks液是不含Ca,Mg的Hanks液，会不会有影响？
抗凝剂应该用什么？试了EDTA和枸橼酸盐抗凝的，都是这个效果。请大家指点一下，万分感激~~~
实验操作如下：1、在离心管中加入与血液等量的淋巴细胞分离液。
2、取抗凝血与等量Hanks液充分混匀，用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上，水平离心2000rpm×20分钟。离心完就是上述结果
而且在将血液往淋巴细胞分离液上加时，即使很小心血液也会往淋巴细胞分离液里渗入。而且随着时间越渗越厉害。是不是淋巴细胞分离液的问题？（分离液购于中科院）
现在用的Hanks液是不含Ca,Mg的Hanks液，会不会有影响？
抗凝剂应该用什么？试了EDTA和枸橼酸盐抗凝的，都是这个效果。请大家指点一下，万分感激~~~
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 3.4 万
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