【求助】小鼠体外受精

我用的是自己配置的HTF，步骤：取精子获能十分钟后加入htf液滴中，后再取卵丘复合体，卵丘复合体加入已经获能的精子中。可是这样做了几次受精的胚胎细胞很少，基本上都没有受精，请问大家这是怎么回事？到底哪里出错了？我想了几个可能出错的地方，希望大家指点一下：
1.精子需要获能1h以上还是获能十分钟就够了？
2.受精液滴中先放入精子还是卵丘复合体？如果先放精子那么还需要在受精液滴中再获能吗？如果先放入卵丘复合体，是放入卵丘复合体之后马上加入精子还是要让卵丘复合体在受精液滴中待一会再放入精子呢？
3.HTF自己配置的，因为有几种试剂很少所以称量时是不是很容易不准确？
4.使用的是sigma的培养皿，组织培养的那种，需要另外买那种IVF专用的培养皿吗？