【求助】大家帮我看看电转化酵母

最近在做毕赤酵母GS115的电转化，不成功啊 请大家帮我看看那里需要改进啊，先谢过了

1 BlnI单酶切线性化载体，载体是pGAPZaA （酶很贵，100ul的体系我用5ul）
2 酚-氯仿抽提乙醇沉淀,10ul水溶
3 制感受态细胞
(1) 50mlYPD培养基加GS115 过夜培养菌液，30度 摇到OD600到1.0左右
（2）菌液4度离心5min 1500g，弃上清30ml预冷无菌水重悬
（3）按步骤2离心，15ml无菌水重悬
（4）按步骤2离心，2ml 1M 山梨醇重悬
（5）按步骤2离心，200ul1M山梨醇重悬
（6）10ul线性化质粒与100ul菌体转于预冷的电转杯中，冰浴5min后电转
（7）电转参数为1500V，25uF，200欧，电转仪是BTX399
（8）1M山梨醇迅速加入电转杯中，30度水浴孵育2h，涂YPDZ（Zecoin抗性）平板，长3天
按照此方法转了两次均失败，其中一次，长满了平板，但是有橘红色的和白色的菌落，摇起来状态不像是酵母，很粘稠，pcr验证也是阴性的。有资料说，电转时间5ms以上转化效率很高，但是我这两次转的全都是5ms但是均没有筛到阳性转化子。
郁闷啊 请高手点拨！谢~~