【分享】仪器分析总结

可见——紫外分光光度法（UV）

200～800nm内有选择性吸收
一、方法特点：
  ⑴选择性较好：①物质本身光谱不同，具选择性吸收；②化学反应使吸收改变。
⑵灵敏度：可测10-4～10-7g/ml。
⑶精密度：相对误差0.2～5%（直接uv0.2～1%；比色法2～5%）。
⑷仪器简单,操作简便。
⑸结合化学计量学方法测复杂样品（多组分）。
⑹测一些化学常数。
二、光谱表示方法和谱带的强弱分类
  表示方法：
  ①吸收曲线表示：A-λ图谱、T-λ图谱、E% 1cm-λ图谱、ε-λ图谱、lgE% 1cm -λ图谱、lgε-λ；
  ②光谱数据法：λmax与溶剂有关，故常以溶剂的λmax表示，E% 1cm·λmax、λmin。
  ⑵谱带的分类：
  ε：～10～100～1000～104～105-7～
   弱 很弱 中强 强 很强
   中强吸收以上——可定量分析
   中强吸收一下——只可做定性分析
  ⑶分子的结构，电子跃迁类型和吸收带；
结构：①饱和烃类：σ～σ*→λmax＜＜200nm
  ②含饱和杂原子的饱和烃：n～σ*跃迁→200nm附近
   -X、-OH、-SH、单个cl取代：λmax＜200nm（末端吸收）
   -cl3、-Br、-I、-NH2：λmax＞200nm（原子数目越多，吸收波长越长）
  ③含孤立双键的分子：烃类λmax＜200nm；
  含不饱和杂原子=O，λmax＞200nm，ε＜100，R带，弱吸收：与烃类相连280～300nm；与-X相连200～240nm。
  ④共轭的π～π体系：λmax＞215nm, ε≥104强吸收，K带
   每增加一个共轭单位，λmax增加30nm左右，5个共轭单位，λmax＞350nm
   σ～π、p～π和π～π都可使λmax增大，而且与取代基的性质和位置有关。
   苯取代： 振动精细结构：溶剂极性增加，精细结构下降；
   取代基性质：极性基团取代，精细结构减弱或消失；
   取代基数目：数目增加，精细结构较弱或消失；
   不饱和基团取代：E1、E2、B、K带λmax增大；
   饱和基团取代：E1、E2、B带λmax增大；
  ⑤立体异构，互变异构
  ⑥PH效应：酸碱基团的离解
  ⑦电荷转移跃迁：配合物显色（内氧化还原过程）。
三、紫外光谱的溶剂
主要考虑：⑴对溶质有适当的溶解度（结构、极性相似：相似相溶）
  ⑵溶剂吸收波长的极限（截止波长A=1）、纯度
  ⑶溶剂的极性和氢键效应：极性增大，K带长移
  ⑷溶剂的挥发性、可燃性、毒性、化学惰性
  ⑸对光的敏感性、放射性、稳定性。
四、影响吸收曲线的因素：
  溶剂、酸碱性、波长、温度、溶解的热效应、干扰离子、离子强度、光照、氧化还原电位、助溶剂、水解、荧光效应、浑浊度、沉淀等。
五、常用空白溶液（参比溶液）的选择
  样品溶液的组成： 被测组分：A=KC；
   样品的共存物（基体）
   溶剂：纯溶剂本身吸收；杂质吸收
   试剂：显色剂、缓冲剂等
   溶解性杂质：容器中吸收的杂质；空气中吸收的杂质
  ①溶剂空白；②试样空白（差示分光光度法——△A法）；③试剂空白（测定波长处A<1）；④平行操作空白；⑤空气空白。
六、物质的鉴别
  核对光谱曲线； 一个或几个λmax ±1～5nm；
   一个或几个λmax、λmin;
  核对光谱数据： λmax、E% 1cm；
   Amax1/ Amax2、Amax/Amin；
   一定浓度下，Aλmax。
七、UV法的误差
  来源：化学因素；光学因素；仪器测量误差；操作误差等。
  （一）化学因素
   化学条件的选择，通过作A与化学条件的图谱（A-PH、Cn、t、T、……），选择曲线平坦且宽敞处对应的条件。
  （二）光学因素：单色光纯度；杂散光；偏光
   1.单色光纯度不好导致吸收曲线变形，使A-C曲线弯曲；
   单色光的谱带宽度（狭缝宽度，nm）、S或△λ；
   △λ大，光越不纯，当△λ合适时，所测A是最大的；
   影响△λ的因素：光的强度，光越强，其值越大；空白的吸收越强，△A越大。
   2.杂散光：单色器通道以外还存在的光占总光的比例
   一般杂散光T%≤1%,《中国药典》用1%的NaI测220nm的T%，要求≤0.8%；用1%的NaNO2测340nm的T%，要求≤0.8%；
   杂散光的误差有多大：△A≤0.434ρ（10A-1）ρ为杂散光的强度
   △A=A理论-A测
   影响：杂散光使A-C曲线向下弯曲，在末端吸收处可能会出现假峰或无峰或峰小。
   250nm以下的杂散光主要为可见光；220nm以下的杂散光很大，不宜用于定量分析。△λ越大，杂散光越强。
   3.背景干扰：溶剂、试剂等背景；浊度背景；荧光
   消除方法：选择合适的空白溶剂、参比液；浑浊会使A增大，产生正误差，且不易稳定，可采用离心或过滤方法防止吸附使A下降，若浊度稳定，用双波长或三波长，导数光谱法测定；荧光背景使A减少，I无穷大于C，而A=lgI/I0=KC，可采用池远离检测器、池后放荧光片、改变溶剂或者降低浓度、增加A-C曲线的点数等方法来消除。
  （三）仪器的测量误差
  ①A=0.1～1.0（一般应用）；A=0.2～0.7（对比法）；A=0.434，误差最小，因此一般A选择在0.3～0.7之内，0.5时误差最大。
  ②使A处于合适范围的方法
  ⅰ改变池的厚度（比色法中）
  ⅱ改变浓度（uv）
  ⅲ改变测定波长
  ③样品测定A值在A～C曲线线性范围内或尽量在直线中点附近；用对比法测定时应使A样尽量接近A标。
  ④回归直线方程的表示方式
  n=5～7
  A=KC+b (r≥0.99（比色法） K、b的有效数字位数分别为：b=×. ××× K=×××；r≥0.999（uv） K、b的有效数字位数分别为：b=×. ×××× K=××××)。
  （四）操作误差
  ①吸收池配对——空白进行基线校正，有池校正与光强校正之分，校正后可放大看到噪声大小，从而判断b、K的取值。
  ②吸收池的位置和方向。
  ③池的污染：手的污染；洗得不干净；擦得不好。
  ④样品的温度应与实验室一致。
  ⑤池内有气泡。
  ⑥波长在紫外区，或用挥发性较强的有机溶剂，池应加盖：防止挥发，防灰尘。
  ⑦光敏样品：测定完立即离开光路。
  ⑧光电管疲劳：连续使用小于5小时。
  ⑨波长校正：找出最大吸收波长是否符合要求。
  （五）为确保分光光度定量的可靠性，须注意：
  △溶液浓度无称量、体积和温度误差；
  △被测定物完全溶解，最好以超声溶解；
  △如有必要，混浊应过滤或离心，且防止吸附损失；
  △不要出现池壁吸收（配对性），做基线校正；
  △池壁干净，池面方向与光方向一致，池内壁无气泡；
  △若对吸光度的准确度要求高时，应考虑单色光纯度（对光谱带宽或狭缝宽度进行校正）；
  △参比液的操作过程应和样品液（对照液）完全相同；
  △样品吸光度在合适范围内测量，优先考虑改变池厚度；
  △在A大和波长小时，杂散光引起A减小，尤其空白吸收效明显时；
  △对吸光度和波长的准确度经常检查，杂散光检查在规定范围内；
  △应遵照厂家推荐的扫描参数和时间常数；
  △仪器环境干净、干燥，无外界干扰（电子干扰、热变化及阳光等）；
  △回归直线方程的正确表达。
  
  
AAS

一、概述
  1.原子吸收法：
  化合物→（约3000℃高温）→气态原子（基态）→（hv）→吸收强度-λ图（原子吸收波谱）200～700nm
  λ：定性的依据；吸收强度：定量的依据
  2.AAS吸收光谱是锐线光谱（谱带宽度10-3nm），所以其选择性很高。
  3.AAS与原子的性质有关：不同原子组成的分子有选择性；相同原子组成分子没有选择性。
  结论：原子吸收法可以测定化合物中元素的组成和含量。
  4.AAS法的特点
    火焰法  石墨炉法  
灵敏度高  测定波长  10-6～10-9g/ml  10-9～10-13g/ml  
  试样的用量  0.5～1ml  5～100uml(0.05mg～30ng固体)  
准确度  相对误差  <1%  2%～5%  
选择性  吸收线窄，谱带不重叠，谱线数不多，2～4条  
应用情况  可直接测70多种元素，间接可测5～6种，还可以测某些有机物  
  5.AAS的缺点
   标准曲线线性范围窄；光源的使用不方便；非金属的分析困难。
二、AAS的原理
  原子的电子能级——光谱项
  nM Lj n：电子层数，主电子数
   M=2S+1 光谱的多层性，反应电子自旋引起的能级分裂
   L：角动量子数，不同原子轨道不同
   j：内量子数，原子轨道与电子自旋相互作用 j=L+S
  例:Na 32 S1/2→(589.0nm)32 P3/2为2j+1的权重衡量。
   基态↓589.6nm
   32 P1/2(共振线，最强线)
三、原子吸收线变宽和吸光度的测定
  1.AAS线的宽度——具有一定宽度的锐线，有3个参数：特征波长（频率）λ0、u0；半宽度；透光强度（吸光度）
  2.谱线变宽是由外部因素引起的，具体如下：
   （1）物理因素
   a.多普列效应：与原子的无规则运动有关。
   b.劳伦兹变宽：吸收原子与其它原子间的碰撞。
   （2）变宽的结果
   a.使测定的灵敏度下降
   b.使A-C曲线向下弯曲
   （3）使用空心阴极灯，进行测定——测峰值吸收，A=kC
四、AAS仪器类型
  1.原子化器：火焰AAS计
   火焰+石墨炉AAS计（可互换）
   氢化原子化器：测As、Hg、**
   冷原子化器：测Hg
  2.光路和背景消除
   单波长： 单光束型（不带或带D2灯背景扣除）校正A<1
   双光束型（不带或带D2灯背景扣除）校正光的强度对波的影响。
双波长双光束型（不带D2灯）可作内标法消除化学干扰
五道医用型：同时可测Cu、Fe、Zn、Mg、Mn
拉曼效应型：扣除A<2的背景吸收。
  3.火焰型AAS和石墨炉AAS的比较：
   （1）火焰法：精密度高，（RSD<1%），价格低，操作简单，灵敏度高。
   （2）石墨炉法：可测难溶的氧化物，不受样品形态的控制，前处理简单，灵敏度高，试样用量少，重复性差，（RSD<5%），价格消费高。
五、仪器的灵敏度和检测限
  1.灵敏度：特征浓度：Sc，1%吸收，A=0.0043所需的浓度ug/ml/1%；
   特征质量：Sm,ug/1%。
   Sc用于火焰型，Sm用于石墨炉AAS计。
   Mg：Sc为0.008ug/ml/1%；Sm：1×10-6ug/1%。
   配吸光度约0.4的溶液，Sc=0.00434×C/A，Sm=0.0043×C×l/A
  2.检测限 空白信号，求σ、3σ
   相对检测限 Dc=3σ×C/A——火焰法
   绝对检测限 Dm——石墨炉法
六、测定条件的选择
  1.试样的处理：防污染
   容器——聚四氟乙烯、聚乙烯、硬质玻璃
   水——去离子水
   溶剂：试剂-高纯度（GR、光谱纯）
   大气：石墨炉AAS、空气洁净化
  通过做空白试验来考察和校正。
  2.样本溶液和对照液的基质组成尽量相同。
  3.避免被测元素损失——挥发、溶解不完全、过滤吸附、器壁吸附
  4.仪器工作条件（火焰型）
   （1）燃气、助燃气的比例、溶剂、种类
   （2）A-C曲线线性范围
   （3）分析线波长：一般选等振线：灵敏、A-C曲线；
   不用等振线：光谱干扰；测高浓度样品时
   （4）狭缝宽度——最佳狭缝宽度，如果有光谱干扰，选△λ小的
   （5）灯电流增大，灵敏度减小，但不能太高（灯坏，狭缝变大），有使用范围
   （6）背景扣除
七、干扰及消除
  四类干扰：电离干扰；物理干扰（背景干扰）；光谱干扰；化学干扰。
  消除方法：标准加入法。
八、定量分析
  1.标准曲线：A=KC+b（r>0.995），5～7个点，样品A=0.2～0.7。
  2.标准加入法：A=K（Cx+Cs）。
  
荧光分析法
一、概述
  1.定义：
  化学发光 原子荧光（x-荧光），测痕量元素
  光致发光
   分子荧光 测痕量化合物，在常温和低温下测定
  2.特点
   （1）灵敏度很高：一般10-9～10-12g/ml,诱导激光10-19g/ml。
  （2）线性范围宽：3～5个数量级。
  （3）选择性好（比紫外好）。
  （4）信息量大：F—λex, F—λem, F—λex—λem, F—△λ（λex-λem）。
  （5）仪器操作简单（类似紫外）。
  3.应用情况
   （1）有天然荧光物质，可用直接荧光法；
   （2）无或弱荧光的物质可用衍生物荧光法；
   （3）可使荧光熄灭的物质，可用荧光熄灭法；
   （4）发光寿命不同的物质，可用时间分辨荧光法；
   （5）荧光光谱严重重叠的物质，可用同步扫描荧光法；
   （6）作为HPLC的常用检测器。
二、荧光的产生
  λex -ν 第一激发单线态最低振动能级 F（λem）基态单线态多振动能级
  （1）λem>λex；
  （2） F—λex和F—λem区别：前者可有几个峰，后者只有一个峰；
  （3）F—λex和A—λ曲线相似，λex可由A—λ曲线上找，用最强λmax作激发波长λex
  （4）选λex（max）和λem（max）作为光谱条件 定性
   定量 ——最灵敏的一组波长
  （5）F—λem曲线的形状与λex无关，F与λex有关。
  （6）物质发光的必备条件 吸收较强：UV-Vis光
   荧光效率φf>0。
  （7）引起荧光的分子结构因素：n—π共轭体系
   刚性和平面性结构：取代基少
   取代基性质 φf增大：杂原子饱和基团
   φf减小：不饱和杂原子基团 ：—CO—、—NO2、—COOH、重离子如—I、—Br
  （8）荧光测试——提高灵敏度和选择性 测无机离子（配合物）
   测有机离子
  三、影响F的外因
   1.温度：Ｔ增高，φf下降；
  　　2.溶剂极性强，荧光效率φf增大，一般在水或醇中测定；
   3.酸度：有机酸、碱的结构与PH有关；
   4.荧光熄灭（Q）剂的影响：
   （1）M*与Q碰撞失去振动能；
   （2）M与Q形成配合物；
   （3）M*与Q碰撞发生电荷转移，M*电荷转移，λmax改变；
   （4）M*与Q碰撞发生电荷转移形成Q→Q*；
   （5）重原子效应：M*（单线态）→M*（三线态）；
   （6）顺磁性物质：溶解O2；
   （7）自熄灭现象（浓度比较高：1g/L）；
   （8）其它分子强烈吸收λex；
   5.表面活性剂影响，形成胶束使M*固定，分散于其中。φf 增大→胶束荧光分析；
   6.散射光： 瑞利光：λem=λex；
   拉曼光：λem>λex，干扰荧光。
   溶剂分子或荧光分子吸收了光子的部分能量（分子振动能），光子能量下降，λem↑
   　 　Eex-Eem=△E振动（与分子性质有关）
   溶剂的拉曼光：1/λex-1/λem=10-7ū（cm-1） 1/λem=0.9975×（1/λex）-3.350×10-4，ū水=3350cm-1（r=0.9999992）。
   消除拉曼光干扰的方法：
  （1）选择合适的λex，使λRm和λem不重叠；
  （2）从样品F值中减去空白的拉曼光（F0）；
  （3）改换溶剂。
四、F—C关系：
一定的λex和λem下，F=K‘×φf×（I0-I） K’为仪器参数；A<0.05时，F=2.303 K‘×φf×I0，测定相对误差6%。
F决定 内因：φf、E
外因：K‘、I0是荧光法比uv法更灵敏的原因
A=KC=-lg（I/I0）
五、定量分析方法：测荧光时使用一个池。F=KC： 作灵敏度校正
空白荧光
1.标准曲线法
（1）性质稳定的基准物 标准物 校正仪器灵敏度 100
被测物 50
（2）空白荧光的扣除： 将空白调到F0=0，再测样品F；
测空白的F0>0，再测样品F，F-F0=KC
对照品和样品的空白不同，同时测Fs0、Fx0作对比，Fx-Fx0=KCx Fs-Fs0=KCs。
（3）标准曲线：F-F0=KC（r>0.999）
  2.比例法
   一般公式：（Fx-F0）/（Fs-F0）=Cx/Cs
   特殊情况： Fx/Fs=Cx/Cs
   F0=∑Fx0 Fs0 （Fx-F0）/（Fs-F0）=Cx/Cs
六、仪器
  1.类型：
  （1）滤光片荧光计：作定量分析（F—F0）—C曲线
  （2）滤光片光栅型荧光分光光度计 F—λem曲线定性
   （F—F0）—C曲线定量
   F—λem 定性
  （3）双光栅型荧光分光光度计 F—λex
   （F—F0）—C曲线定量
  2.样品池：
   （1）λex<360nm，石英池
  （2）λex>360nm，玻璃池
  3.仪器校正：灵敏度校正；波长校正；激发光谱和荧光光谱的校正
七、荧光新技术
1.激光荧光分析：I0大；2.时间分辨荧光法——免疫分析；3.同步扫描荧光法；4.胶束增敏荧光法。
色谱法
第一节 色谱参数（基本原理）
一、色谱图—色谱流出曲线—浓度-时间图
min
mv μv ** μ**
GC HPLC
色谱图=基线+色谱峰
   正常基线：反应仪器及操作条件的稳定程度。
  1.基线 噪声（音）：偶然误差引起→放大峰—峰间距离
漂移：基线随时间方向产生的慢慢地变化mv/h
正常峰（对称峰）：0.95～ 1.05
  2.色谱峰 拖尾峰→GC多：<0.95
   前延峰→HPLC多：>1.05
   用对称因子、拖尾因子（fs）来衡量是哪种峰。
  3.等温线：Cs—Cm图（Cs为固定相中浓度，Cm为流动相中浓度）
   （1）线性等温线 tR=tm(1+KVs/Vm)
   Cs
  
   K= Cs/ Cm（常数） 对称峰
   ↓
   平衡常数
   Cm
   （2）凸型等温线
   Cs
  
   K不为常数 拖尾峰（在固定相上不断吸附和分开活性中心）
  
  
  
   Cm
   （3）凹型等温线
   Cs
  
  
   K不为常数 前延峰（样品或者杂质吸附于柱上）
  
   Cm
   注：只要进样量少或者适量均可得到正常峰。
  
  
  
  
二、色谱参数
  1.死时间（tm、t0）；死体积（Vm、V0） 进样器
2.保留时间（tR）；保留体积VR： tr=(L/μ)×(1+KVs/Vm)= tm（1+k）
   VR= Vm+KVs VR与m相流动速度无关。
  3.调整保留时间（tR′）；调整保留体积（VR′）
   tR′= tmk 色谱柱
   VR′=k Vs 等距色谱 →tm
  4.比移值（Rf） ↑
   Rf= tm/ tR = VR/ Vm=SR/S吗=1/（1+1+KVs/Vm）=1/（1+R）（流动相中
时间与整个柱子中所花的时间之比） ↓ 检测器
   等时色谱 →t0
  5.相对保留值ri/s=t′Ri/t′Rs=Ki/Ks=ki/ks 指纹图谱中常用
   TLC Rst=SRfi/SRds≠Ki/Ks
  6.保留指数（I）：GC中通用定性标准。
   原理：利用正构烷烃lgtR′与碳原子数（z）成线性关系。
   Ix=100[z+n×lgrR(x)/R(z)/lgrR(z+n)/R(z)] 当n=1时，误差最小。
   I=A+B/（Tc+C）
三、柱效参数
  1.σ（标准差）、W1/2(半峰宽)、W
  2.n（理论塔板数）、H（峰高）
   n =5.54（tR/ W1/2）2=16(tR/ W)2 n取决于S相性质、粒度分布、柱长（L），不同的组分在同一柱上有不同的理论塔板数。
   n与柱长有关：n=L/H （L为柱长，H为板高且不变）=（tR/σ）2
   GC 填充柱：n=103～104,L为1～5m。
   毛细管柱：n=104～107,L为10～30m，常用30m。
   HPLC：n=103～104，L为10～30cm。
   有效理论塔板数neff=( tR′/σ)2
  3.分离度（R）
   (1)R=2（tR1- tR2）/（W1+W2）=====△tR/W（W1=W2）=1.5（6σ分离）99.7%以上分离完全，但对拖尾峰和前延峰时不一定，R>2，2.5.
   (2)影响R的因素：
  R=/4×(α-1)/α×k2/(1+k2) α（选择分配系数）=k2/k1=tR2′/tR1′
   ↓ ↓ ↓
  A柱效相 B柱选择项 C容量因子项
  K：四个影响因素：两相性质、柱温、组分
  A项：柱的品质：装柱、密度、基本性质、m相流速
   措施：增加柱长：n↑, tR↑, W↑,H(峰高)↓，灵敏度↓；减少塔板高度（H）。
  B项：α=1组分难分离，α与两相性质与柱温有关：HPLC与GC各有不同的方式，HPLC的T不太变，GC的T变化。
  C项：k2（容量因子） HPLC中流动相配比改变
   GC中主要是柱温改变，改变固定相配比。
  k2=1～10之间较好；当k2>20，对R几乎无贡献，最好在2～5之间。
  R达到要求时，tR小，n大。
第二节 基本理论
一、塔板理论（相平衡或热力学理论）
计算流出曲线—色谱峰：C=C0/σ×exp[-（t-tR）2/σ2]，当t=tR时，Cmax= C0/σ=h，A= Cmax×C0/σ= C0=1.065h W1/2.
峰面积与浓度成正比——定量依据
峰高与浓度成正比——定量依据（必须是对称峰）→即σ为常数。
二、速率理论—动力学理论—范式方程（GLC）—峰扩散问题—H—μ曲线
  1.GLC：H=2λdp+2γDm/ μ+0.01k2/(1+k)2×dp2/Dm×μ+2k/3(1+k)2×df2/Ds×μ
   ↓ ↓ ↓ ↓
   涡流扩散项 纵向扩散项 气相传质阻抗项 液相传质阻抗项
  df：固定液膜厚度 λ：填充不规则因子 dp：填充粒度 k：容量因子 μ：流速
  γ：与填充物有关的因子 Dm：组分在气相中的扩散系数 Ds：组分在液相中的扩散系数
  2.H=A+B/μ+Cμ
   （1）在一定色谱条件下，A、B、C为常数。
  求A、B、C由三个μ下的H来求 μ=L/tm(L为柱长，tm为空气中死时间)
   H=L/16×（W/ tR）2=L/5.54×（W1/2/ tR）2=L/n
（2）求导H′=-B/L2+C=0时，μ为最佳流速μopt=，实际分析时，通常在稍高于
μopt下工作（3～10倍） tR小，分析速度快：tR=L/μ×（1+k）
H变化小，柱效高。
  3.说明
  A项：2λdp——粒小，填充匀则柱效高
  填充柱 50～100目，λ=3，HA=1.4mm
  200～400目，λ=8，HA=0.9mm
  开管柱（毛细管柱5，10μm）：A=0
  B项：2γDm
白色硅藻土：0.74
  γ填料 红色硅藻土：0.46→多孔，表面积太大
   玻璃球：0.6～0.7
   开管柱：γ=1
Dm=1/ 用分子量大的载气可提高柱效→N2；用H2作载气可提高流速，但使tR降低。
Dm∝Tc→柱温低，柱效高（n大），固定液不流失。
K—K∝1/Tc→Tc小，k大，tR大，分析时间长，灵敏度下降。
  C项：C=Cm+ Cs
  
  
  
   气相中：Cm Dm大，0.01k2/(1+k)2小，使C→0，可忽略；
   Cs=2k/(1+k)2×df2/Ds：Ds∝Tc，Tc增大，提高柱效
   B项，提高柱温，降低柱效 有最佳柱温，程
   K∝1/Tc，提高柱温，降低柱效 序升温GC
   df：df小，柱效高，可能使R减小，k=KVs/Vm，柱效减低
   分析高沸点样品，低固定相配比（1～10%）,用白色硅藻土载体
   分析低沸点样品，高固定相赔补（10～25%），用红色硅藻土载体。
  4.色谱条件
  填料种类、粒度和分布、填充均匀、载气种类、流速、固定液种类和配比高低（厚度）、柱温、（Ds、Dm、k）。
  5.各种GC中的范氏方程：
  （1）在一般的填充柱GC中：Cm→0；
  （2）在快速的填充柱GC中：薄液膜（df小），高载气流速（H2）；
  （3）开口毛细管柱GC中：A=0，B=2 Dm（γ=1）
   涂壁开管柱：df小（1μm以下），Cs→0
  柱子 多孔层开管柱：df中等
   载体涂开管柱：df稍大，Cs不能忽略
  毛细管柱最大的问题是：k小，tR小分不开→增加柱长，提高柱效，增加tR
  填充柱：1～5m，毛细管柱：10～300m。
  开管柱的优点：柱效高，分析速度快
   H=2Dm/μ+Cmμ μopt==4Dm/γ× k小，μopt大；γ小，μopt大。
   Hmin=2=γ γ小，柱效高。
  6.HPLC的范氏方程
  H=A+B/μ+( Cm+ Cs+ Cms) μ
  ODS：C18十八烷基硅烷键合相
  B/μ B=2γDm，Dm在高压下很小，μ比较大，B→0，B/μ→0。
  Cs→0（化学键合相，单分子层液膜，df很小）
  H=A+（Cm+ Cms）μ=A+Cμ=2λdp+（Cm+ Cms）×dp2/Dm×μ
   5～10μm，1～2μm（超高效HPLC）
  7.HPLC色谱条件选择
  （1）填料粒度小，分布均匀（商品柱），填充均匀，则柱效高→关键是填料粒度（dp）
  牌号←C18硅胶柱（250mm×4.6mm，5μm）（长度，内径，液膜厚度）
  提高柱温可提高柱效（Tc≤65℃）
  Tc影响tR及其重复性，影响k、H和n。
  大分子物质分离用较高Tc，对生物活性样品用低Tc；Tc太高，m相产生有机溶剂蒸汽，n下降。 乙腈：0.34mpa.s与水的混合溶剂都有最低粘度
  降低流动相粘度，可提高柱效 甲醇：0.54mpa.s
   乙醇：1.08mpa.s
  用低流速的流动相可提高柱效：一般常用1ml/min，范围0.5～2ml/min
  （2）柱外效应：柱外扩散

  
  GC法
色谱柱
气—固色谱柱
   S相 吸附剂（无机）：活性炭（非）、硅胶、氧化铝、分子筛→分离异构体-中等极性以下
   高分子多孔小球（有机）GDX
  
   苯乙烯+二乙烯苯的聚合物→非极性S相-极性大地残留溶剂→分离速度快（tR小），峰形对称，分离组分数小，极性大者先出柱，分子量小者先出柱。
   三氯乙烯+二乙烯苯的聚合物→弱-中等极性
   吡咯烷酮+二乙烯苯的聚合物→中等极性
  分离机理：分配、吸附作用、分子筛作用。
气—液色谱（GCL）柱→载体+固定液
固定液选择
（1）化学结构
烃类：角鲨烷→非极性；
  聚硅氧烷：[ R1-Si-O ]n R，n大使用温度越高；
   CH3 SE-30 极性大
  改变R可改变极性 苯基 OV-17
   —CF3 OV-210
   —CN OV-225 极性小
醇类：聚乙二醇 PEG-600/20M（极性PEG-600> PEG-20M）
酯类：DNP、DEDS（极性很强）
2.固定液的极性参数 相对极性
罗氏常数
麦氏常数
  3.已知样品的固定液选择
  （1）“相似相溶”原则：相似 极性相似
   官能团相似
   结构相似
  分子间作用力的总和
（2）两个差别 极性差别：选极性固定液
沸点差别：选非极性固定液
（3）混合固定液 固定液混涂
不同极性的填料混装
不同极性的柱串联
  4.未知性质样品的固定液选择
（1）毛细管初分：角鲨烷、SE-30、PEG- 20M、OV-225
（2）填充柱（尝试法）：SE-30、PEG- 20M、OV-17、OV-210、DEDS


  5.载体选择
（1）硅藻土担体
硅藻土担体（60～80目、80～100目）  
  红色  白色  
比表面  4m2/g  1 m2/g  
配固定液极性  非极性  极性  
固定液配比  10～25%  1～15%  
样品  极性小，沸点低  极性大，沸点高  
（2）玻璃微球：60～80目，比表面小，固定液配比小（<0.5%），在低温下分析高沸点样品，作快生日分析（R小，tR小），高灵敏检测器，适于分析热不稳定的样品。
（3）表面处理 酸洗担体：用于分析酸式酯类成分
碱洗担体：用于分析碱类成分
硅烷化担体：用于分析成氢键很强的样品
（三）检测器
  1.分类与指标
  （1）按选择性分类 通用型：TCD（热导检测器）
   专属型：FID（氢火焰离子化检测器）测含C有机物
  （2）按检测原理分类 浓度型：S（信号强度）∝C，n与载气流速无关，A∝1/F，F恒定用A定量
   质量型：S∝dw/dt，n与F成正比，n∝F，A与F无关，最好用A定量
  2.性能 噪音（声）N：越灵敏的仪器，N越大
   检测限LOD：越灵敏的仪器，LOD越低 TCD：10-9g/ml；FID：10-12g/s；
  ECD：10-14g/s
   灵敏度
   线性范围
二、实验条件选择
  1.色谱柱选择 固定液选择，k大小适合 固定液极性 影响tR，n，上样量
   固定液配比
   柱长（0.5～5m）L： n↑，高效
   tR↑，高速
   R↑，高分离效能
  2.柱温（Tc）选择
   根据样品沸点选择柱温—恒温GC
样品b.p  Tc  固定液配比  硅藻土担体  
300～400  200～450  1～5%  白色  
200～300  150～180  5～10%  白色  
100～200  ～50  10～15%  红、白色  
<100  或50  15～25%  红色  
  柱温应低于固定液最高使用温度；对宽沸程的样品用程序升温GC法。。
  Tc是改善分离的重要参数，Tc与K、k、Dm、Ds有关。
   K=Cs/ Cm=γm/γs×e(μmσ-μsσ)/RT lgk=a+b/ Tc lg tR′=lgtm×KVs/Vm=A+B/T
   降低Tc的好点： 降低Dm，减少纵向扩散，n↑
   增大K，增加S相得选择性
   减少固定液流失 提高柱寿命
   检测本底升高或者污染检测器
  降低Tc的缺点： Ds减少，峰变宽，柱效低（高固定液配比时注意）
   K大，R大→tR大
  使难分离的组分对达到分离良好的要求下，尽量使用低柱温。
3.载气选择 载气种类 三方面 柱效 H∝种类，μ>μopt
   载气流速：20～80ml/min 降低柱压（长柱，柱压高；短柱，柱压低）
   检测灵敏度TCD H2 （很低浓度）
   N2 （很高浓度）
   4.进样量：柱越长（0.5～5m），越粗（1～6mm），进样量越大，越灵敏
   进样量少，分离好，峰形对称，用高灵敏度检测器
   进样气体：0.1～1ml，进样液体：0.1～1μl（<0.4μl）
   5.气化室温度（Tg）Tg=Tc+（10～50℃）
   Tg取决于样品的挥发性（b.p），一般Tg>b.p,n大
   热稳定性较差的样品Tg< b.p-50℃（进样量要少）
   6.检测器温度（TD）：TD>或≈Tg；FID：TD>150℃
三、定量分析
  1.相对重量 面积 校正因子fi 组分性质和检测器种类有关
   峰高 与标准物选择有关
   fi=(As/ms)/(Ai/mi) FDI：s是庚烷，TCD：s是苯
   用h表示时，σ一定，对称峰，分离稍差也无关紧要。
  2.测定方法 外标法：中药常用，西药少用（复杂的用）
   内标法：中药少用，西药常用
   归一化：都用得少
  （1）外标一点法：b=0，b<KCmin,b/(KCmin+b)≤2% A=KC+b
   外标两点法：b>>0
  （2）内标法：p%=Wi/W×100%=fiAiWs/fsAsWi×100%
   内标对比法：Ai/As=KCi+b→0（内标浓度一定） Ai/As=Ci/Cs
   (Ai/As)x/(Ai/As)r=(C%)x/(C%)r
  （3）归一化法：所有组分要出峰，而且峰面积差别不大，但做纯度检测例外。
  （4）三者比较：外标法准确度不高，但操作简单；内标法对进样量、仪器要求高，且准确率高；归一化法对进样量、仪器要求高，但要求准确率在某些情况下会比较低。
四、HPLC的基本方法
  1.方法学考察—效能指标的验证
  （1）专属性（特效性、选择性）
  HPLC专属性涉及 色谱柱的分离效能—三个图 对照品HPLC图
   检测器的性质 空白样品（阴性样品）HPLC图
   样品HPLC图
   uv 可变波长→专属性
   DAD
   荧光λex/λem
   电化学 ECD
   MS检测器
  （2）准确率：用回收率试验来验证
   做法： 辅料+对照品（醇）
   样品+对照品（加样回收）→（中药）95%～105%，RSD≤2%
  西药：分高（120%）中（100%）低（80%）三个浓度，每种浓度做3份，共9份。
  中药：一般同加入量做6份（5～6份）[样品0.5g，含A多少，在加相应重量的对照品A]
  回收率%=（C-A）/B×100% （C为所测，A为样品，B为对照品）
  （3）精密度
  仪器的精密度试验：同一对照品（供试品）连续进样6次，求面积（峰高）的RSD。
  方法的精密度试验： 重复性试验：同一样品取6份进行相同样品处理，然后进样测定
   稳定性试验：同一样品测8、12、24、48（间隔相同），5～6个点，RSD≤2%
   重现性试验
  （4）线性和线性范围：Y=Kx+b（r≥0.9990）；若RSD≥1%，则Y保留3为有效数字，K相同。y=648786x+15637→y=6.49×104+1.6×104
  
  线性范围 m：范围在10倍以上
   C
  （5）定量限：N/S=10：1（信号/噪声），对准确率和精密度有要求。
   检测限：N/S=2：1或3：1，对准确率和精密度无要求。
  （6）耐用性
   HPLC中考察因素：流动相组成、PH、柱子品牌、厂家、柱温、μ、检测波长。
  2.色谱条件
  柱子：品牌、填料种类、键合相、柱长、内径、粒度
   YWG—C18H37：十八烷基硅烷化硅胶（250mm×4.6mm，10μm）Spherisorb:ODS RP-C18
  流动相：乙腈—水（85：15）→0.1%H3PO4液（用三乙胺调PH5.2）；甲醇—水
  流速：1ml/min（ml·min-1）；柱温：40℃
  检测波长（或检测器种类）：
  进样量：？μl
  3.系统适用性试验参数： tR
  理论塔板数：n、R、fs拖尾因子、RSD 峰面积（峰高）
   校正因子：外标法用对照品，内标法用对照法/内标
  组分试验参数；内标试验参数
  4.定性分析方法 色谱鉴别法——与对照品的tR
   化学鉴别法
   LC—MS LC—DAD
  5.定量分析方法—类似GC
   中药分析以外表法为主 A—C曲线
   外表一点法
   外表两点法
  6.痕量分析：0.01%以下
  （1）减少柱内稀释—用细径短柱 tR↓，W↓，L↓，k↓=0.5～1.5
   稀释：内径小，稀释倍数小，4.6mm减少1mm少稀释20倍
  （2）用细粒填料，提高柱效（n大），W↓
  （3）用高灵敏度的检测器（荧光、MS）
  （4）用峰高法定量
  （5）必要时对样品进行富集、浓缩或衍生化
  7.杂质限量测定：面积归一化法—对照品的纯度检查
  8.制备HPLC
  （1）分离条件的选择：使用分析相同的固定相，粒径20～40μm；最好用等强度固定洗脱：（流动相配比不变）溶剂的纯度高、挥发性；保持与分析柱相同的保留值tR，原理：流量比=柱内径比平方，即VR制备/VR分析=(d制备/d分析)2。
  （2）上样量：一般在超载条件下工作，按两柱的容量比放大：CsVs+CmVm=容量；上样质量超载或浓度超载——出现拖尾峰；上样体积超载（浓度稀时）——对称的平头峰（≈W1/2）；上样浓度和体积都超载；实际工作中超载的R=1比较适合；未分开的可循环上样，在3～4次。
五、化学键合相色谱（BPC）分离条件选择
  1.化学键合相
  （1）类型
  
  
CH3 CH3 —R（C1、**、C8、C18）
   苯环
  —Si—O—Si—C18H37 (OH2)3— (CH2—OH)2 正相
   —NH2 反相
   Si—OH —C≡N
  
  （2）含碳量覆盖度→C% C18：5～40%，k大，柱长<25cm，r2.1=K2/K1。柱子必须买相同的柱子，以备检验用。 键合硅醇基数/总硅醇基数（25%～50%）
  峰尾柱与峰端柱：硅醇基用四甲基硅烷封闭，不拖尾。
  （3）特点：稳定性较好，可作梯度洗脱，柱效高，粒径细、选择性好、进样量较GC大，柱的使用寿命较长，灵敏度高。
  2.流动相选择
  （1）RP—HPLC：水（基础溶剂）+有机改进剂（乙腈、甲醇、乙醇、四氢呋喃）
   流动相极性：甲醇（乙腈）比例增大，极性下降，tR下降。
   水：P′=10.2，甲醇：P′=5.1，乙腈：P′=5.8
  Pi′=φaPa′+φbPb′ φa+φb=1 lgk1/k2=1/2(P1′- P2′) k=tR′/tm
  流动相中加0.1～1%的醋酸钠，磷酸二氢钠，减弱硅醇基对样品的媳妇，减少拖尾，改善分离。
  （2）离子抑制RP—HPLC：水+有机改性剂+弱酸（弱碱）或PH缓冲液
   抑制弱酸（碱）的电离，使极性减少，有利于进入固定相，也可防止拖尾
   A.应用对象：分离3≤PKa≤7的弱酸，7≤PKa≤8的弱碱
   B.硅胶化学键合相PH条件：PH2～8（常见），封尾PH1.5～11
   流动相加弱酸（0.1%磷酸、1%醋酸、甲酸）或弱碱（氨水、三乙胺、H2PO4-— HPO42-）来抑制组分的电离，使tR↑，R↑，峰对称，变窄。
  （3）离子对RP—HPLC
   A.应用对象：易电离的有机酸碱
   B.m相：水+有机调整剂（改善PH）+PH缓冲剂（弱酸或碱，使有机酸碱离解）+离子对试剂
   C.离子对试剂 季铵盐或叔胺→分析 —COOH PKa<2
   —SO3H
   烷基磺酸盐→C5～C8：樟脑磺酸盐→分析有机碱
  
   十二烷基硫酸钠
   D.以（**H9）4N+OH为例
   R
   R
  N+·-OOC—R 极性小的离子对，易进入固定相。
   R
   R
  Am+Bm+ → (A-·B+)S KA/B(平衡常数)=[A-·B+]s/[A-]m·[B+]m=K（分配系数）/[B+]m
  测杂质，使主成分极性下降后出峰，使用离子对HPLC使杂质先出峰。
   E. tR的调整
   [A-]m=δA-·Cm=Ka/(Ka+[H+])·Cm tR=L/μ[H·KA/B·[B+]m·Ka/(Ka+[H+])·Vs/Vm]
  讨论：a.[B+]m↑, tR↑。[B+]m不可太高，～10mmol/L形成胶束；
  b.离子对试剂的R基的C数↑，tR↑，改变KA/B；
  c.PH↑ 分析酸，tR↑
   分析碱，tR↓
d.有机调整剂比例↑，tR↓；
  e.C↑H↓，tR↑；
  f. Vs/Vm↑, tR↑。
  3.洗脱技术
  （1）分类
   等（强）度（或固定）洗脱（A）
   梯度洗脱（B）：线性洗脱、阶梯形洗脱、凸形洗脱、凹形洗脱。
  （2）定义
  A：一个分析周期内流动相组成恒定——同一组分的K值不变，容量因子k=1～10。
  B：一个分析周期内流动相按一定程距改变——同一组分的K值不断减小。
  （3）应用对象
  A：组分数目少，性质差别不大的试样，尤其是定量分析
  B：组分数目多，性质差别大的复杂试样，如指纹图谱
  （4）特点
  A：常用，简便，重现性好，基线稳定，结果更可靠。
  B：缩短分析时间，柱效高，灵敏度高，峰不易拖尾，峰形对称。
  缺点：基线漂移，重现性较差，操作麻烦。
  （5）四种梯度对tR的影响：
   ①极性梯度 正相LLC：m相的极性由小到大
  反相LLC：m相得极性由大到小，有机相比例↑
  ②PH梯度 离子抑制 分析弱酸，PH↑，由小到大
  分析弱碱，PH↑，由大到小
  离子对反相 分析酸，PH由大到小
  分析碱，PH由小到大
  ③离子对浓度梯度：离子对试剂浓度由大到小
  ④盐浓度梯度：离子交换色谱由小到大。
  （6）注意点
   ①溶剂的互溶性
  ②溶剂的纯度高，UV下测苯等杂志
  ③柱用后要再生
  4.溶样溶剂：
  一般用与m相相同的溶剂；对于含电解质的m相，一般不用此m相溶解样品。
  例：阿片中8种生物碱和罂粟酸的RP—HPLC分析
  苯基键合相/A+B，作梯度洗脱
  A液：H3PO3+三乙胺缓冲液+甲醇—水（5.95）PH3.20
   扫尾剂；离子对试剂
  B液：H3PO3+三乙胺缓冲液+甲醇—水（70～30）PH3.95
  吗啡  罂粟碱  可待因  蒂巴因  
tR  3.34  5.26  7.58  14.58  
  5.检测器
  （1）可变波长的UV检测器
  灵敏度受流速和Tc的影响较少，适于梯度洗脱
  性能：光源、光电管都有可能老化，温度可影响m相的折射率（光损失）
  吸光度：0.75%/2℃；流速改变，压力变化，折射率改变；A变化，η↑，压力↑；检测器内有气泡；260nm以下，O2可引起噪声；漂移：双柱和双光束，可消除。
  （2）DAD（二极管阵列）：作tR—A—λ三维图
   ①选各组分的λmax作测定波长：各组分测定，照顾各组分的灵敏度和含量
  ②作定性鉴别
  
  
药品质量控制中的现代分析方法与技术
现代色谱分析
一、毛细管气相色谱法：高分辨率，柱效高，开管型→挥发油
1.开管柱
  （1）特点：固定液量很少
（2）类型：
①壁涂层开管柱→容量低，不适于痕量分析和室温下分析低分子量成分及永久气体。
②载体涂层开管柱（SCOT）：应用广，可作痕量组分分析。
常用柱：交联弹性石英开管柱（3000多）
③大内径厚液膜开管柱：柱容量大，痕量和低分子分析
④微内径开管柱：高分离效能。
开管柱内径↓，μopt↑，更适用于快速分析。
  （3）柱内径：柱内径要兼顾柱效，分析速度和柱容量，0.25～0.53mm。
  （4）液膜厚度：df=0.1μm～5μm；df↑，柱容量↑。
  （5）柱温：Tc↓，tR↑，毛细管柱常用于程序升温GC。
  （6）进样量：n↓10%是最大允许进样量，与柱长、k正比，与n成反比
  2.选择毛细管柱：
  （1）填充柱不能达到分离度（α≥1.015），t长。
  （2）b.p≥2℃,选非极性柱；b.p≤2℃，选极性较大柱。
  （3）高沸点：选耐热、高温
  （4）常用柱（OV—10、OV—210、PEG—20M）
  3.进样方式
  （1）直接进样：分流（30～50：1）和不分流进样（大内径厚液膜开管柱）
  （2）顶空进样：在非气态和气态达到平衡后，→吸空气进样
   N2吹尾：提高灵敏度；顶空GC：液上气相色谱法或顶空分析法；
   优点：含量低；不能直接进样的；最低LOD减小。
   基本原理：Ai=fi·pi=fi·γi·pi0·xi →组分
   ↓ 组分蒸汽压
   γi=1时理想，但其不等于1
   当T一定时，气液平衡，若Vs不变，则Cg=C0/（K+ρ）。其中Cg为气相中被测组分浓度，Cs为液相中被测组分浓度，C0为样品中被测组分原始浓度，K=Cs/Cg，为气—液相中被测组分平衡常数。
  静态顶空GC装置：？
二、手性药物HPLC：纯度检查，分离
  三点相互作用：对映体与CSP相互作用的部位，吸引，排斥等。
  拆分：直接法（CMP法）和间接法（衍生试剂法）
  （1）柱前手性衍生化法（GDR法）：高光学温度，速率有时不同，非手性柱，提高检测灵敏度，生物样品分析。
  （2）手性流动相拆分法（CMP法）：
   手性添加剂：①配基交换型手性添加剂（CLEC）
  ②CD环糊精：分子大小形成CD化合物
   常用：β—CD、γ—CD或改性CD
  ③手性离子对络合剂（CIPC）。
  （3）手性固定相拆分法（CSP）：
   蛋白质 π—碱型
   三种常用 环糊精 → π—酸型 电荷转移型手性固定相
   铜绿 氨基酸型
   蛋白质：牛血清蛋白（BSA）
   CD：疏水性，每个glu有5个手性碳
   CDR法：条件简易，普通柱，预分离，光学纬度高。
   CMP法：范围的有限，添加剂不稳定，干扰，条件简易，不必柱前衍生化。
   CSP法：各类化合物，分析可靠，常规及生物样品，某些需柱前衍生化。
三、超高速（UPLC）：速度、灵敏度及分离度为HPLC的9、3、和1.7倍；压力大（>140pa）。
  1.dp↓，更宽优化线速度
  2.dp↓，分离速度↑
   条件：dp<2μm；超高压溶剂泵；泵片死体积小；快速自动进样；高速检测系统；更适合LC—MS。
四、超临界（SFC）色谱
SF为流动相，硅胶或化学键合相为“S”
对象：热敏性，低挥发性化合物，比GC广；
特点：比HPLC分离制备快，更易于MS、FT—IR和MNR连用。
五、高速逆流色谱（HSCCC）high-speed counter-current chronati
  1.特点：
  （1）固定相为液体；
  （2）不出现，峰畸形，拖尾；
  （3）回收率↑；
  （4）制备量大，重现性好；
  （5）体系更换，平衡方便快捷。
  2.基本原理：离心力→混合 梯度洗脱
  3.装置：进液部；分离部分；输出部分
六、CE法
  1.特点：
  （1）高效；（2）快速；（3）微量；（4）低消耗，无污染；（5）多模式，应用广；（6）水溶性成分下分析
  胶束电动毛细管色谱（MECC或MEKC）
  毛细管等电聚焦（CIEF）：等电点差别对生物大分子进行分离的电泳技术。
  非水毛细电泳（NACE）：以有机溶剂为主，有其中溶解度。
  毛细管点色谱（CEC）
七、色谱联用技术：提高分离与分辨能力
  1.GC—GC：（多维），多以填充柱为预柱→毛细管柱→主柱，预柱→冷肼→主柱系统
  2.HPLC—HPLC：关键技术是柱切换，利于提高分离效率，节约流动相，缩短时间
  3.HPLC—CE：两种机理正交分离方法，大大提高提高峰容量，CE作二维；高频率切割一维流出物，快速分离；CE必有极快采样和分离速度。
  4.GC—MS：分离、鉴定和定量一次完成；水型四级杆，离子肼→小分子泵元件：色谱单元；接口（直接、开口）；质谱单位和数据处理。
  （1）MS单元：电子轰击源（EI）：分子离子与碎片；化学电离源(CI)：分子离子峰→主体结构；其他离子源：场致（FI）
  （2）分析器：四级杆质量分析器；三重四级质量分析器；离子肼质量分析器
  （3）谱图：
  ①总离子色谱图：总离子强度—tR图
  ②质谱图：TLC图，可以得到任何一个组分MS图（化合物分析信息、定性）
  ③质量色谱图：提取离子色谱图
  ④选择离子监测（SIM）技术：提高灵敏度；可以消除其他组分的干扰
  ⑤谱库检索：匹配度大小顺序排列：误选；考虑本底影响，可能性大小，不作定性分析的唯一方法。
  5.HPLC—MS
  （1）离子化方法：电喷雾电离（ESI）→大小分子都适用；
   酸碱离子用ESI（-）和ESI（+）检测
  （2）APCE：单电荷离子，M<1000，准分子离子，很少有碎片→极性化合物
  （3）四级杆、离子肼、飞行时间质谱（生物大分子）
  6.CE—MS：生物大分子、蛋白质、生物碱
  7.LC—NMR：解决多数有机物的化学结构问题
   连续，停流，峰存操作模式→不中断HPLC，获全部良好成分分离。
   色峰最高点到达NMR液膜中心位置
   电感耦合等离子体MS（ICP—MS）样品用ICP离子化后，按离子的质荷比分离，LOD低，线性宽，谱线简便，干扰少，精密度高，分析速度快，多元素，较理想离子源。
  
填充柱的制备
  一、要求：填料粒度分布均匀；固定液涂渍均匀；载体表面活性中心，全部覆盖；柱内填充均匀：柱内无死体积；载体填充中不破碎
  二、固定液涂渍：选择合适的溶剂固定液—差GC手册；固定液配比定义—固定液填料总重%（1—25%）；固定液与载体重量比（方便使用）。
固定液配比因素：样品沸点；载体比表面。
三、分析低沸点样品，用高固定液配比，红色载体（tR合适，df小，提高柱效）
  分析高沸点样品，用低固定液配比，白色载体（tR合适，峰不拖尾）
四、涂渍方法
  1.蒸发法：固定液用量小；柱效低些（涂不匀，载体碎）
  2.过滤法：柱效高些；固定液用量多，不易控制配比
五、柱的填充：
  1.柱清洗烘干：碱—水—（酸—水）—醇—醚；干；
   细柱不用
  2.测柱体积（载体体积）：加水量体积；计算Tc（d）2L；
  3.填充方法：
  抽气法：一头塞入玻璃丝，一头塞入玻璃丝再加上钢丝后接检测器，填柱时接泵。
六、老化
  1.静态老化：填料涂固定液后进行→温度比：最高使用温度DNP160℃，低30～50℃；时间：2～4小时；作用：去水、残留溶剂及杂质，固定液渗入孔内（均匀）
  2.动态老化：装柱后于GC仪上进行。120℃开始，4小时内不损检测器，充载气，然后入检测器到基线稳定。