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【求助】Golgi染色、Cajal 染色

发布于 2009-06-03 · 浏览 7635 · IP 浙江浙江
这个帖子发布于 16 年零 1 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我最近做了几次小鼠脑组织的Golgi染色,刚开始做时在网上找了几个protocol,按protocol上的做: 将小鼠脑组织先用2.5%的重铬酸钾避光浸泡3天,每天换液;再用2%的硝酸银避光浸泡3天,每天换液;最后用振动切片机切片,脱水、透明、封片等。第一次的结果还可以,除了小脑,皮质、海马都染的很好,皮质的层次结构都很清楚。但后来染色的结果就很不好了,每次就染上很少的几个细胞,都没法比较了。虽然Golgi染色的特点就是被染上的神经元是随机的,但也不至于一个脑组织就染上几个细胞吧?这还怎么比较呢?
因此,后来又找到Cajal银染法,据说Cajal银染法可以比较清楚的看到spine,我的实验就是想看spine。我是在丁香园里找到的protocol,如下:

Cajal银浸染法 此法由Spielmeyer法与Bielschowsky法演化而来,染小脑原纤维最好,可用于对肿瘤的研究。
[固定]甲醛液。冰冻切片厚20~30um.
[试剂配制](1)硝酸银溶液 2%硝酸银水溶液100ml,吡啶8滴,95%乙醇5ml.
(2)对苯二酚甲醛还原液 对苯二酚0.3g,蒸馏水70ml,10%甲醛液20ml,丙酮10ml.
[染色方法(1)冰冻切片用蒸馏水充分清洗。
(2)于室温下用硝酸银溶液浸染6~12h,若置于37度温箱内则浸染2~5h,至切片呈浅棕色为止。
(3)用95%乙醇速洗2次。
(4)用对苯二酚甲醛还原液1~3min.
(5)蒸馏水洗2min.
(6)用0.2%氯化金水溶液调色5~10min。
(7)蒸馏水稍洗。
(8)在5%硫代硫酸钠中固定3min.
(9)蒸馏水洗2次
(10)将切片组织浸于50%乙醇内,裱于载玻片上,用滤纸稍吸干。
(11)无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
[结果]神经原纤维呈棕至黑色,无髓鞘轴突变染色,背景紫灰色。

我染的结果不稳定,有时觉得染不上。如下:可以看到黑色的神经原纤维,但看不到或看不清胞体,并且背景色很深,这也不便于观察,详见附图。请各位大侠帮我看看,我的这个染色结果有那些地方需要改进的?谢谢!
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最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 7635

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