【交流】关于快速质粒鉴定方法（省时，省钱）
这个帖子发布于 16 年零 26 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
关于快速质粒鉴定方法（省时，省钱）
ldsyau
严于律己；宽以待人！
战友已经发了一个protocol
protocol：
0.从平板上挑单菌落，越多越好（20－30），放于1.5ml离心管中，加1.2ml 左右的液体LB培养基，摇3－5h. 200rpm
1.用1.5ml离心管收集一定量(1ml,留0.2ml)含有重组质粒的菌液，10000rpm, 30sec,弃上 清，留管底沉淀（应留有一定量(0.2)的菌液放于4度中，以备摇菌）
2.加入30－50ul TE ,重悬菌液，混合均匀
3.加入25ul 酚:氯仿:异戊醇（25:24:1),混合均匀
4.加入5ul 上样缓冲液（6X or10X),混合均匀,12000rpm, 10min,
取蓝色上清液（约20－30ul)直接进行电泳，结果会显示条带
a:最上边，几万bp的条带是基因组DNA
b:其次，下边是你所要的重组质粒，约几千bp
c:再下边可能会出现RNA的三条带，总共就这几条带
通过经验，来判断一下看看哪个应该是连上了，哪个没连上，最后把连上的那个挑出来，然后用放在 4度中的对应的那个菌，摇菌，第二天再提质粒
就可以了。简单，方便，省时，省钱....
我用了一下，还可以，但有些问题
再问说上个帖子过了回复期
所以另开贴子想问问其他战友我问题如何解答
先谢谢了
请问
pcr能批出三五千kb的片段吗
怎么设计
我用过楼主的方法
还可以
不过上清量一般会多余20-30ul
加上buffer后很稀
跑胶有时都看不清楚
不知你是如何解决的
可不可以
在加酚氯仿后
先离心
再吸上清到呈有等体积的异丙醇中
在离心
用乙醇洗涤后加无核酸水跑胶
这样也可以省点buffer
ldsyau
严于律己；宽以待人！
战友已经发了一个protocol
protocol：
0.从平板上挑单菌落，越多越好（20－30），放于1.5ml离心管中，加1.2ml 左右的液体LB培养基，摇3－5h. 200rpm
1.用1.5ml离心管收集一定量(1ml,留0.2ml)含有重组质粒的菌液，10000rpm, 30sec,弃上 清，留管底沉淀（应留有一定量(0.2)的菌液放于4度中，以备摇菌）
2.加入30－50ul TE ,重悬菌液，混合均匀
3.加入25ul 酚:氯仿:异戊醇（25:24:1),混合均匀
4.加入5ul 上样缓冲液（6X or10X),混合均匀,12000rpm, 10min,
取蓝色上清液（约20－30ul)直接进行电泳，结果会显示条带
a:最上边，几万bp的条带是基因组DNA
b:其次，下边是你所要的重组质粒，约几千bp
c:再下边可能会出现RNA的三条带，总共就这几条带
通过经验，来判断一下看看哪个应该是连上了，哪个没连上，最后把连上的那个挑出来，然后用放在 4度中的对应的那个菌，摇菌，第二天再提质粒
就可以了。简单，方便，省时，省钱....
我用了一下，还可以，但有些问题
再问说上个帖子过了回复期
所以另开贴子想问问其他战友我问题如何解答
先谢谢了
请问
pcr能批出三五千kb的片段吗
怎么设计
我用过楼主的方法
还可以
不过上清量一般会多余20-30ul
加上buffer后很稀
跑胶有时都看不清楚
不知你是如何解决的
可不可以
在加酚氯仿后
先离心
再吸上清到呈有等体积的异丙醇中
在离心
用乙醇洗涤后加无核酸水跑胶
这样也可以省点buffer
