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【求助】求助载体连接

最后编辑于 2009-04-01 · IP 美国美国
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这个帖子发布于 16 年零 86 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我想将一个6kb的基因连入lenti-virus载体中,最终如果成功,载体大小为14kb左右。我使用的两个内切酶是SpeI 和NsiI, Insert 是PCR产物,通过酶切得到相应的末端,Vector 和Insert比例,我用的是1:6. 我试过几次,按照常规的方法酶切连接转化细菌,得到非常少的几个colony, 但PCR检测都不正确。

在此求助高手指点,对于这种大片段的连接,有什么需要注意或技巧么?谢谢!

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