求救RT_pcr，结果老是不稳定啊。看来需要调整。各位专家请教了

我得RT－pcr就是跑不出来。用的是tarkalar的一步法试剂盒试剂盒提供的阳性对照有的可以跑出来，说明试剂盒应该是好的。
以下是我采用试剂盒提取的细胞的总mRNA,
稀释40倍测定
260：0.518
280：0.252
ration:20.6
密度：20.7μg/ml
每一次用1μg样本。
引物：

1
sense primer 5′-TGTTCATGCCGACGCTTGCA-3′
antisense primer 5′-TTCCAACTACACAGTTTATT-3′

2
sense, 5’-CAACATCACCTATTGGATCC-3’;
antisense, 5’-CGGGTGTAGAGTCTCTCGCT-3
反映条件：

逆转录：50度20分，以后是95度5分，94度30秒，60度30秒，72度1分，74度10分。
一什么也没有，二有一个白色的脱尾。
请高手帮忙
我改怎么办？
顺序是mark, 2,3是 因物1的，45是引物2的。引物是参照文献的