【求助】【求助】sal1和not1的酶切
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请问有没有人用pGEX-5X-1载体的sal1和not1位点呀？两个位点间只相隔4个碱基，我用not1先切，胶回收后再用sal1切，纯化。PCR产物是用这两个酶双切过夜。连接、转化后，只有几个菌，提质粒，酶切鉴定，仍为自连。做了好多次，都没结果。都快疯了！:~):(有没有高手做过一样或类似的？请指点指点，谢谢!
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请问有没有人用pGEX-5X-1载体的sal1和not1位点呀？两个位点间只相隔4个碱基，我用not1先切，胶回收后再用sal1切，纯化。PCR产物是用这两个酶双切过夜。连接、转化后，只有几个菌，提质粒，酶切鉴定，仍为自连。做了好多次，都没结果。都快疯了！:~):(有没有高手做过一样或类似的？请指点指点，谢谢!
