【求助】盐酸胍溶解的变性蛋白吸附不到离子交换柱上？
这个帖子发布于 16 年零 302 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我的GST融合蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达， 我用6M 盐酸胍溶解包涵体后，上阳离子交换柱（我的目标蛋白用蛋白
软件预测等电点在9.2左右），所以我用了ph7.5的50mM 磷酸盐缓冲液作为start buffer, start buffer 里含有8M尿素， elution buffer
里也含8M尿素，还有1M NaCI, 但奇怪的是我的目标蛋白大部分随着 start buffer 给冲洗了下来（SDS-PAGE鉴定），很少挂到柱子上，
需注明的是我的盐酸胍溶解样是可以溶解在start buffer 里的， 并且在上柱前是用start buffer 稀释了5倍，并跳ph值到7.5.
小弟现在在做包涵体的纯化及复性！ 想通过离子交换柱进行尿素浓度梯度复性，但必须得先让目标蛋白吸附到柱子填料上吧，
最近这个鬼复性把我给搞死了，迟迟拿不到我的目标蛋白。
望各位色谱高手给指点指点啊
还有希望做过蛋白复性的高人能多多交流交流！！！
软件预测等电点在9.2左右），所以我用了ph7.5的50mM 磷酸盐缓冲液作为start buffer, start buffer 里含有8M尿素， elution buffer
里也含8M尿素，还有1M NaCI, 但奇怪的是我的目标蛋白大部分随着 start buffer 给冲洗了下来（SDS-PAGE鉴定），很少挂到柱子上，
需注明的是我的盐酸胍溶解样是可以溶解在start buffer 里的， 并且在上柱前是用start buffer 稀释了5倍，并跳ph值到7.5.
小弟现在在做包涵体的纯化及复性！ 想通过离子交换柱进行尿素浓度梯度复性，但必须得先让目标蛋白吸附到柱子填料上吧，
最近这个鬼复性把我给搞死了，迟迟拿不到我的目标蛋白。
望各位色谱高手给指点指点啊
还有希望做过蛋白复性的高人能多多交流交流！！！
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