【分享】有做不对称ＰＣＲ的进来
发布于 2008-09-08 · 浏览 6208 · IP 辽宁辽宁
这个帖子发布于 16 年零 269 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近，做了一段时间的不对称ＰＣＲ效果不是太理想！
有做过的请赐教！我把知道的大致总结一下
不对称ＰＣＲ
原理：不对称PCR中，典型的引物浓度比例是50：1或100：1。这样在最初的PCR循环（15个循环左右）中，决大多数的PCR产物是双链的并以指数式积累。当低浓度的引物被用尽后，进一步进行循环时，则会过量产生两条链中的一条链，此单链DNA是以线性方式积累。
方法：一次法 需要摸引物比例条件 但非特异性带增多！
二次法 第一次对称产物做摸板单引物扩增，比较费时！有时需要纯化！
单链检测：在native-ＰＡＧＥ中单连泳动比双连慢！
我觉得可以跑一下变性胶比较一下双连和单连是否在一个位置！
有做过的请赐教！我把知道的大致总结一下
不对称ＰＣＲ
原理：不对称PCR中，典型的引物浓度比例是50：1或100：1。这样在最初的PCR循环（15个循环左右）中，决大多数的PCR产物是双链的并以指数式积累。当低浓度的引物被用尽后，进一步进行循环时，则会过量产生两条链中的一条链，此单链DNA是以线性方式积累。
方法：一次法 需要摸引物比例条件 但非特异性带增多！
二次法 第一次对称产物做摸板单引物扩增，比较费时！有时需要纯化！
单链检测：在native-ＰＡＧＥ中单连泳动比双连慢！
我觉得可以跑一下变性胶比较一下双连和单连是否在一个位置！
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 6208
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