胞内表达,胞外不表达!!
我的酵母表达初步结果已经出来了。结果发现,pPIC3.5K载体的胞内分泌检测到酶活性,可能是破壁不好(玻璃珠法),酶活还赶不上大肠杆菌的表观酶活;而pPIC9K载体的胞外分泌选了5个没一个有检测到活性的。现在还没跑SDS-PAGE,不知道是胞外没表达还是表达了没活性,今天准备再选一些转化子检测。
另外,你知道有预测蛋白质空间结构的软件么?最好能形成立体结构图的。因为我的融合表达酶蛋白表现出了一些比天然酶蛋白/非融合表达酶蛋白不同的特性,一是热稳定性增加,二是酶耐受的pH值向碱性方向移动了1.5个pH,我想从预测的三维结构上做一些直观的比较(国外已报道天然酶蛋白的结构)。
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1650