【分享】贴壁细胞的脂质体转染protocol

贴壁细胞的脂质体转染protocol


一、实验材料

1、宿主细胞CHO（贴壁细胞）
2、脂质体LIPOFECTAMINE 2000（invitrogen公司）
3、6孔细胞培养版
4、无血清培养基OPTI-MEM（GIBICO）
5、转染级质粒

二、实验步骤

invitrogen的LIPOFECTAMINE 2000说明书上列举了24孔、12孔、6孔......板的实验体系，因为需要转染的细胞量大，所以一直采用的是6孔版做的转染。以下是以6孔板为例说明一下我的体系和方法吧！

1、转染前一天，以合适的细胞密度接种到6孔培养板上。（我的接种密度是3~4*105/ml.）转染时，细胞要达到90~95%的融合。

2、溶液1：240ul 无血清培养基 + 10 ul lipofectamine 2000 per well （总体积250 ul）（温育5min）

3、溶液2：X ul 无血清培养基 + 4 ug 质粒 per well（总体积250 ul）

4、将溶液1与溶液2混合，室温下置20min。

5、与此同时，将6孔板中的细胞用无血清培养基冲洗细胞两遍后，加入2ml 无血清培养基。

6、将溶液1与溶液2的混合液逐滴加入孔中，摇动培养板，轻轻混匀。在37℃，5％的CO2中保温5~6小时。

7、6小时后，更换含有血清的全培养基，在37℃，5％的CO2中48~72h检测转染水平。

8、如果做稳定转染，换全培养基培养后24h，即可以1：10或更高的稀释比例（根据细胞的生长情况）接种到新的培养板，加抗生素进行筛选。