天狼星红(Sirius Red)***染色方法

记得有站友曾经询问过天狼星红(Sirius Red)那里有售的，现在我详细介绍一下方法及原理：
已知胶原有四型（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）区分并定量这四种胶原纤维，对于研究病变的发生机理和演变过程有一定的意义。利用胶原蛋白聚合及其缠绕螺旋排列不同的特点，使用天狼星红***染色法，在偏振光显微镜下，可以根据双折光性和着色的不同，分别显示出四型胶原纤维。
[组织固定与切片]
4%甲醛液固定组织，石蜡切片。
[试剂配制]
（1）  天狼星红-饱和***液：0.5%天狼星红10ml，***饱和水溶液90ml。
（2）  天青石蓝液：天青石蓝B1.25g，铁明矾1.25g，蒸馏水250ml。溶解煮沸，冷却后过滤，加入甘油30ml，然后再加入浓硫酸0.5ml（注意硫酸一定要后加入）。
[操作步骤]
（1）  石蜡切片厚4~6µm，脱蜡至水。
（2）  入天青石蓝液5~10min。
（3）  蒸馏水冲洗3次。
（4）  天狼星红饱和***液15~30min；（可用Harris苏木素液淡染细胞核）。
（5）  直接用无水乙醇分化与脱水。
（6）  二甲苯透明、光学树胶封固。
[染色结果]
普通光镜观察：胶原纤维呈红色，细胞核呈绿色，其他成分呈黄色。
偏振光显微镜下观察：
Ⅰ型胶原纤维：红色或黄色，排列紧密，具强双折光性。
Ⅱ型胶原纤维：多种色彩，疏松网状、弱双折光性。
Ⅲ型胶原纤维：绿色、细纤维、弱双折光性。
Ⅳ型胶原纤维：淡黄色、弱双折光性（基膜成分）。
[注意事项]
为保持色彩鲜艳，应在染色后及时观察并照相。
[出处]梁晓俐主编《病理学基础与实验技术》，军事医学科学出版社