【求助】琼脂扩散试验

我现在做一个琼脂扩散试验（单扩，双扩）同时在做，开始我发现琼脂板在18小时左右全变成一张薄膜，后将琼脂板放在密闭的干燥器内，干燥器底层防水 ，琼脂内水分终于没挥发，基本不变薄，第一个遇到的问题解决，继续做实验，在加样孔加入相应的抗原抗体，但几小时后加样孔中的液体全消失了，也没见沉淀线的痕迹。（抗原，抗体的滴度都是比较高的，HI HA试验验证。）
我的疑问是1为什么没有沉淀线出现？
2抗原，抗体孔中的水分到哪去了？如果挥发的话，琼脂板应该变薄，同样的条件，水分的挥发应该一致，加样时孔中的液面高度和琼脂基本是一样的，如果水分是挥发了，琼脂的厚度应该像层薄膜；如果是扩散到琼脂中去了，应该出现沉淀线的痕迹，但没有。大家做这个实验的时候，加样孔中的水大概多久就干了呢？
3琼脂板的封底，一般是火焰封底，我也封过，在操作中，我掌握的标准是在火焰上来回过几次，到孔底的玻璃板发烫为止，时间长，温度太高，琼脂就会重新溶化。不知大家是如何封底的？我想到过我加进去的液体会不会从琼脂和玻璃板之间流失，但我封过底，也不可能每个孔的液体都流走的。
4琼脂扩散试验大部分要求是37度，有些也说可以在常温下进行，我想37度无非就是扩散速度快点，也不破环抗原抗体而已，我采用的是常温，而且我觉得基本上都可以采用常温，我多用点时间看结果就是了，不知我的观点是否正确。
希望做过这个实验的战友给我分析分析，给我个满意回答。