长片段基因克隆是基因克隆技术难点---今天一篇推文把长片段克隆学会
长片段克隆利用同源序列，可以分成几个片段进行先后组装，以提高组装成功率。在前面介绍的基础上，本Protocol介绍长片段（>5000bp）无缝克隆。其中，核心点在于：（1）合理分配各片段大小；（2）一定要用高保真酶进行PCR反应，以保证PCR时尽可能避免突变或者缺失产生（建议使用高保真酶，进口PCR管）。根据目的片段大小，分段PCR，然后跟载体连接构建重组表达质粒。步骤一：下载目的基因CDS，并导入SnapGene：可见，目的基因CDS长达10000bp以上，插入pDNA3.1-flag载体后，整体长度超过15000bp。想单次从genome上PCR获得目的基因的CDS简直就是难于登天，而且，
