【求助】ELISPOT实验中出现的问题

最近在做ELISPOT的实验但其结果并不十分理想，出现以下情况不知道如何解释，请各路高手指点一下：
1：实验孔中出现许多斑片。
2：背景不清晰。
3：阴性对照出现斑点，而且有时阴性对照斑点比刺激物要多。