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【求助】关于大肠杆菌做电镜实验的预处理

最后编辑于 2022-10-09 · IP 辽宁辽宁
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这个帖子发布于 18 年零 214 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近想做对大肠杆菌做个SEM和TEM以及ICP实验,但是照电镜的老师要我自己对样品进行预处理,自己没做过,比较郁闷,看了一些资料,对于处理过程都没有太详细的介绍(自己以前不是学生物的,对一些基本的东西不了解),所以还请大家多多指教,过程越详细越好。先谢谢大家啦!
对于固定化的过程,我自己是这么理解的:将菌悬液3000rmp离心10min,用生理盐水清洗3次,加入2.5%的戊二醛预固定30min,再3000rmp离心10min,用生理盐水清洗3次,加入1%锇酸于4℃固定1h,再以前述方法离心洗涤,再脱水,对么?中间有些细节不明白,在加入每一种试剂前,大肠杆菌都是离心后去上清液的吗,试剂的加入量是多少?
对于脱水过程,资料上介绍分别用50,70,90,100%的乙醇脱水10min,是将该浓度的乙醇加到菌液中放置10min后离心再加入另外的浓度吗,离心转数和时间是多少啊?
做ICP实验时,有一个细胞的解离的步骤,看文献报道是用的HNO3和HClO4,但具体的配比和操作过程都不知道,是直接培养的菌液不用任何处理就离解么?


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