毕赤酵母分泌表达出现问题～～求救～～

我现在有个问题毕赤酵母中本来应该分泌表达的蛋白可是在上清中却检测不到，而在细胞裂解物中却有相应分子量的目的蛋白带出现是怎么回事啊？ 我插入的位点并没有切割掉信号肽。我表达的蛋白文献上也都是说是分泌表达，我检查了一下自己步骤没意识到什么地方出现了问题，请大家给我一些意见。