有关ELISA的一个问题

我这几天作ELISA遇到的一个问题，检测对象是一种植物大蛋白的单抗和腹水，包被浓度5ug/ml，作了几次之后都是白板，怀疑是酶标二抗（北京巴尔芘购买）的问题，再作一次，平行选用三种酶标二抗，分别是华美，巴尔芘，和中山，结果是出现了两块白块，只有华美的作出结果，且结果是只有原液到稀释1000倍出现了梯度，吸光值也不高，最大值只有0.57。
现有几个问题：（1）巴尔芘我没有用过，不敢保证，但中山我几个星期前刚测过别的抗体，可以用，为什么只有华美才能测出
（2）这次所测的单抗两年前测滴度在10的6次方还有活性，而腹水是今年年初所制，为什么活性会掉的这么厉害
（3）原液的吸光值才0.57，是否说明抗体已以不能用了，如果将包被浓度提高到8或10结果是否有大的改变