求助!!HUVEC细胞高脂高糖造模!
最近在用高脂高糖干预HUVEC细胞造糖尿病血管内皮损伤模型,打算通过PCR来测VEGF和bFGF的表达量,要是显著降低就说明造模成功,然而现在pcr跑了好几板,这俩指标一直都是显著增高。。
我铺板用的ECM(含糖5.6)完培贴壁24h,换含有1%血清的ECM完培(不含生长因子)饥饿培养6h(因为之前看园子里有人说这个细胞最多饥饿12h,所以没敢饥饿太久),然后换高脂高糖完培(含5%血清,不加生长因子)干预24h,提rna和反转录整个过程敢肯定没有问题,但是跑定量结果VEGF 和bFGF均显著增高,和预期完全相反。我以为是造模时间不够,甚至想到会不会是细胞的代偿反应,于是重新铺板造模48h,然而结果还是没变,现在不知道到底哪里出了问题,会不会和饥饿时间太短有关系呢?饥饿培养这个步骤是否对VEGF的含量有很大的影响呢?毕竟平时养细胞时培养基里面是有生长因子的。此外,镜下观察造模组确确实实细胞死的很多,48h能飘1/3的细胞,但尽管这样结果还是相反的。恳请各位大佬们进来看看!除了能通过测这两个指标证明造模成功之外请各位大佬告知还有没有别的什么检测指标?救救孩子吧!