没有-80℃冰箱，如何冻存细胞？
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最近养的MC3T3-E1细胞，生长状况非常好，于是冻存了几管。今天复苏了一管，发现成活率只有20%左右，大部分细胞都是悬浮的没有贴壁。因为实验室没有-80冰箱，只有液氮罐，所以之前冻存的操作是4℃ 30min，-20℃ 2h，液氮上层8-12h（过夜），放入液氮下。
请问这样操作有问题嘛？我买了 无血清细胞冻存液，但是说明书上液要求放在-80℃至少过夜，液氮上层可以嘛？会不会因为液氮上层的温度也很低，所以会有影响呢？
2021年1月31日更新：
已经养了半年，现在细胞已经稳定。最后使用无血清的细胞冻存液，不需要再添加其他成分，直接使用，并且可以直接放在液氮上层冻存。不过我后来的方案都是，加入冻存液后，在-20度冻20分钟左右（液体冻住即可），然后放到液氮上层过夜，第二天放入液氮。复苏率基本在95%以上，非常稳定。
如果不购买无血清细胞冻存液，用DMSO也可以，方案是4度半小时，-20度半小时，液氮上层过夜，液氮保存。复苏率85-90%，也很好。感谢大家的帮助和建议，祝科研顺利！
