星形胶质细胞原代培养求救~！

刚开始学习星形胶质细胞的原代培养，但是不太成功，想请教一下是不是那个步骤出了问题？

1.75%酒精泡半分钟，端头取大脑，剥除软脑膜（全程在遇冷的pbs/生理盐水中进行）

2.用*吹打脑组织，弄碎

3.消化：消化用的是0.05%的胰酶，一般消化一分钟左右就会出现很明显的“胶状飘絮”，师姐说可能是消化过度了。

（但是我看网上很多人都是0.25%的消化半个小时？消化应该怎么把握时间和浓度呢？）

4.于是1min后就终止消化了。加等量全培终止消化（全培：25ml低糖DMEM+5ml血清+500ul双抗，没有加pbs可以吗？）把飘絮吸掉（飘絮里会不会损失特别多细胞呢？）

5.筛网：用的是70um的细胞过滤器，但是不太会用，可以不用吗？

6.离心：1000rpm，5min。弃去上清液，加全培接种。

7.一只SD乳鼠大脑，培养3个小培养皿。这样的密度合适吗？

还请大佬们不吝赐教，万分感谢！