【求助】结肠BrdU 免疫组化DAB染色
发布于 2020-08-19 · 浏览 1476 · IP 日本日本
这个帖子发布于 4 年零 273 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近在做结肠的Brdu免疫组化，已经持续两个多月了DAB一直观察不到阳性细胞
我的步骤是：
切片10微米
4% formaldehyde 10min 固定
用TBST 洗三次每
次5分钟
1摩尔盐酸37度1小时
Borax 10分钟
用TBST 洗三次每次5分钟
0.2%Triton 10分钟
用TBST 洗三次每次5分钟
3%双氧水 10分钟
用TBST 洗三次每次5分钟
Blocking 30分钟
一抗过夜
1% milk 洗3次每次十分钟
二抗一小时
用TBST 洗三次每次5分钟
用水洗三次每次5分钟
DAB反应（是WAKO的片剂，一片10mg, 溶解在PH7.6 的Tris-HCl 50ml中，加30%双氧水10微升，因为我在显微镜下看不到阳性细胞所以三分钟后停止的反应）
用水洗3次，每次2-3秒
用Hematoxylin染色
结果如第一张图
之前用DAPI染过，如图二，所以一抗和Brdu应该是没问题的
用二抗直接与DAB反应，会立即变棕色，所以DAB本身也是没问题的
苦恼问题到底出在哪里，希望各位老师前辈指教，谢谢大家
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1476
3 收藏点赞
