如何用lps诱导H9C2细胞建立脓毒症心肌损伤模型？

60mm培养皿，高糖培养基，10%胎牛血清，双抗培养基5ml培养细胞。分别于提取细胞蛋白(细胞传代后3天)前的6 12 24 48小时加入LPS，在培养基中加入DPBS溶解的LPS 500ul (浓度为1mg/ml)，使LPS终浓度为100ug/ml提取蛋白后，75℃煮15min，立即放到负八十冻存，第二天即开始做western, 但仍然诱导不出TLR4,NOX4等炎症通路蛋白及caspase3(35kd,17kd,19kd)。想不出到底哪个地方出问题，请高手赐教！