番红O-固绿（SO/FG）染色

番红O-固绿染色（Safranin O and Fast Green staining）

一、原理[1]

• 番红O（Safranin O，SO）是一种碱性染料，与嗜碱性的软骨组织结合呈红色。
• 固绿（Fast Green，也称快绿）是一种酸性染料，与嗜酸性的骨组织结合呈绿色。

呈红色的软骨组织与呈绿色的骨组织对比鲜明，从而可以将软骨组织与骨组织区分开。

1、番红O

番红O（Safranin O）是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨组织是基于阳离子染料与蛋白多糖中阴离子基团（硫酸软骨素或硫酸角质素）结合，并不与胶原结合。番红O着色与阴离子的浓度近似成正比关系，间接反映基质中蛋白多糖的含量和分布。正常的软骨基质分布均匀一致，当软骨受到损伤时，创伤刺激可使软骨基质中糖蛋白立即释放活化，使基质成分发生变化，从而导致番红O呈现淡染乃至失染[1,2]。

2、固绿

固绿与结构疏松的胶原纤维牢固结合，不易褪色[1,2]。

二、操作步骤

1、石蜡切片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇溶液脱水，详见HE染色。# 冷冻切片无需二甲苯脱蜡及梯度乙醇溶液脱水，其余操作相同。

2、核染：Weigert苏木素[2]滴染 5 min，自来水洗去多余染液。酸性分化液分化 15 s，直接泡入蒸馏水洗 10 min。

• Weigert A液与B液 1:1 混合，现配现用[2]。
• Weigert苏木素为铁苏木素，具有更强的着色力，而一般的苏木素着色力不强[2]。

3、固绿：固绿染液[2]滴染 5 min，甩掉多余染料，不清洗。使用弱酸溶液[2]洗片 15 s 以去除多余的固绿染液，甩掉多余液体，不清洗。

• 注意，固绿、弱酸、番红，均不清洗，甩掉多余液体即可。否则染色不佳。

4、番红：番红O染液[2]滴染 5 min，甩掉多余染料，不清洗。

5、梯度乙醇溶液脱水，二甲苯透明。

• 95%乙醇 3 s，无水乙醇Ⅰ 3 s，无水乙醇Ⅱ、二甲苯Ⅰ、Ⅱ 1 min。
• 番红O染液易被酒精洗掉，因此跳过低浓度乙醇[2]。

6、中性树胶封固，同HE染色。

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参考文献

[1]姬瑞娟, 孙爱军, 施丽英,等. 番红O-固绿染色在关节组织学应用的改进[J]. 解剖学杂志, 2011, 034(005):716-718.

[2]改良番红O-固绿软骨染色液_组织染色液_染色液_染色试剂_索莱宝-专业生化试剂网上商城 (solarbio.com)，说明书：1626241672384431515.pdf (solarbio.com)

[3]赵宇朋,周平辉,官建中.大鼠尾椎间盘不同切片方式及染色方法的组织学观察比较[J].实验动物与比较医学,2021,41(02):100-107.