流式检测代替细胞用的补偿微球怎么选?怎么用?
答:补偿微球(以下简称beads)常替代真实的细胞进行补偿的调节,特点当然是方便,好用并且节省样本。以下几点是新手在使用过程中需要注意的:
1.beads必须对应同一来源的抗体,注意是来源相同。例如:抗体是Mouse anti human或者Mouse anti pig等等,那就选用Mouse的beads。
2.beads使用前记得摇一摇,对没错,和某牌饮料一样,当然别喝了。
3.用beads调补偿,最好准备一管不染色的beads做阴性空白来调电压,因为beads和细胞还是有区别的。
4.beads做单阳必须不能加isotype,绝对!一定不可以!别问我咋知道的。
原因:同型非特异性结合FC端,beads都是FC端结合的,所以加了同型的话都会结合上去,从而造成各个通道都有阳性,而没办法调补偿
5.两管beads各一滴,直接加入对应抗体孵育即可,时间匆忙可不洗直接重悬上机。当然最好是洗一下,再上机!
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 3353