单抗 非还原电泳 主带下方120kD 杂带成因 讨论。

在进行抗体非还原电泳时，经常能看到主带下方有杂带，分子量约120kD，几种原因解释。

1、一些文献解释是二硫键重排，尤其是IgG2 等，加入IAM NEM可以抑制这种作用，效果显著

2、 处理过程产生的片段HHL ，与分子量较为接近

3、结构影响，导致电荷不均一，迁移率不同 

一个项目  70℃加热五分钟得到如下图谱，非还原下方120杂带。

样品室温反应后检测。120kD增大非常显著，

进行了加热梯度实验。除70度样品以外，其余与室温反应样品类似，120kD条带显著。 加入IAM后，效果类似。 根据以上判断，加热温度非常重要。 加热的目的就是蛋白变性，并且和sds进行充分的结合，是为了破坏蛋白质的高级结构.煮过的蛋白跑胶就不会受到它本身高级结构的影响,只和大小相关.不煮的话,跑胶的速率就与很多其他因素相关,特别是高级结构。

  这个实验是否能说明 120kD这条条带，也可能是结构影响，电荷不均一导致？
是否有战友做过切胶回收后，进行进一步MS坚定？

  All sample were load 5ugM: Mark1:mab 25℃      2: 45℃       3: 70℃        4:25℃ +IAM      5: 45℃+ IAM  6:70℃+IAM     7  :Reduced 70℃