吸收-放散试验标准操作规程

 吸收-放散试验标准操作规程

1. 目的

  建立吸收放散试验标准操作规程，确保吸收放散试验操作的规范性和结果的可靠性。

2. 原理

  抗体与相应抗原在适合条件下可以发生凝集或致敏，但这种结合是可逆的，如果改变某些物理条件时，抗体可以从结合的红细胞上解脱下来。表达弱血型抗原（A或B）的红细胞与相应抗体反应不出现凝集现象，但可以吸收相应的抗体，被吸收的抗体可以放散出来，检测和鉴定该放散出来的抗体，可以证明相应抗原的存在。

3. 范围

  弱血型抗原的鉴定；血型抗体的分离与鉴定。本试验操作规程主要选取弱A/B抗原鉴定制定相应试验流程。

4. 器材与试剂

4.1器材：0412-1台式离心机、塑料软试管、塑料硬质试管（75×12mm）、试管架、一次性塑料滴管、记号笔；

4.2试剂：生理盐水、抗球蛋白试剂（市售单克隆或多克隆）、致敏的阳性对照细胞（自制）。

4.3标本：抗凝静脉血3毫升，4℃保存。

5. 操作程序

5.1吸收试验

5.1.1 生理盐水洗涤1ml压积红细胞（同时用O型红细胞做阴性对照）。至少3遍，最后一次洗涤后，尽量弃去试管中红细胞沉淀上的所有上清盐水；

5.1.2 如怀疑是弱A（或弱B）抗原红细胞，在洗涤后的红细胞中加入1ml抗A（或抗B）；

5.1.3 将红细胞与抗体试剂充分混合，在4℃条件下孵育2小时（也可过夜），期间不时轻摇试管，混合红细胞与血型抗体；

5.1.4 3500rpm离心5min，去除所有上清（抗A或抗B试剂）；

5.1.5将红细胞转移到另一支洁净试管中，用较大体积冰生理盐水洗涤红细胞至少6遍。保存最后一遍洗涤离心后上清，检测其中是否残留游离抗体，如有应继续洗涤，直至没有游离抗体存在；

5.1.6 应用适当方法对洗涤后的红细胞进行放散，弱A、B抗原检测一般用热放散。

5.2热放散试验

5.2.1将洗涤后受检者压积红细胞一份加1份生理盐水（同时用O型红细胞做阴性对照）。置于56℃水浴箱中，不断摇动1分钟，静置9分钟，使吸附在红细胞上的抗体充分放散下来。

5.2.2立即将试管以3000转每分钟离心1分钟，取上清液。

5.2.3将放散液用标准红细胞悬液鉴定，即可检出受检者红细胞血型。

5.3乙醚放散试验

5.3.1取经洗涤3次的受检者压积红细胞1份加1份生理盐水，2份乙醚，加入到带塞的玻璃大试管内，剧烈振荡1-2分钟，然后以3500rpm（1000g，0412-1离心机）离心1分钟；

5.3.2离心后分成3层，上层是乙醚，中间是红细胞基质，下层是放散液，呈深红色；

5.3.3用吸管吸出下层放散液，置37℃水浴10分钟以上，除尽乙醚，保持水浴开盖；

5.3.4再次离心，取上清液即为放散液；

5.3.5滴放散液加1滴抗人球试剂，即用经典抗人球法检测乙醚释放液。

6. 参考依据

6.1《人类红细胞血型学实用理论与实验技术》（中国科技技术出版社）

6.2《输血技术学》（第二版）

注意事项：冰盐水洗涤6遍时，速度要快。