crispr没有效果
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小弟最近用Lenticrispr v2质粒敲除肺癌细胞的DR5基因，病毒感染后用puromycin筛细胞，筛了一个多星期，我筛的时候师兄告诉我，是加药筛一天，然后换液不加药，让细胞长起来在接着加药，现在筛出来的细胞加puromycin死的不多了。
然后筛出来的细胞提取基因组，扩DR5片段，测序，然后没有套峰出现。
之前验证了sgrna的效率，是通过一个验证质粒，这个质粒上有一个EGFP，在EGFP插入了DR5的片段，将V2-SGRNA和验证质粒共转染，cas9起作用的话，EGFP才会表达，在荧光显微镜下也看见了荧光。
所以现在为什么筛出来的细胞DR5基因没有发生修饰呢？
这个是靶点验证质粒
