兔洗涤血小板发生自聚,请做过这个实验的老师给予帮助!
各位老师大家好:
我在用洗涤的兔血小板做血小板聚集实验,我的实验过程中洗涤兔血小板后,用含钙2mM的Ca2+缓冲液悬浮血小板,血小板发生自聚,不知道原因究竟是什么?以下是我的实验过程和条件摸索情况
血小板制备:雄性兔子取血后,以3.8%枸橼酸钠1:9抗凝/ACD也试过,全血4℃,250×g离心10min得PRP,然后用3倍的无钙明胶台氏液(137mM NaCl,2.7mM KCl,11.9mM NaHCO3,1mM MgCl2, 5.5 mM glucose,0.23mM EGTA and 2.5g/L 明胶,PH=6.5.)洗涤血小板,4℃,900×g离心10min得血小板,洗涤两次。最后,将血小板悬浮在台氏液中(不含EGTA,含有1.8mM CaCl2,PH7.4)。
血小板洗涤液和悬浮液也试过试验方法学上无明胶有BSA的方子,还把钙离子的浓度做过调整(0.25mM-2mM),血小板在洗涤液中不会发生自聚,有时在加入悬浮液后自聚,有时在聚集仪上实验时发生40min内的最大聚集率为20%的可逆性聚集,我实在不知道问题出在哪了?悬浮液我也换过,钙离子浓度也调整过,自聚经常发生,请各位老师给予指教,万分感谢!(ps:悬浮液无钙加入诱导剂后血小板不聚集)
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 3543