活体成像用生物发光白血病细胞株K562-GFP-luc

K562-GFP-luc白血病细胞

1.        细胞名称   K562-GFP-luc
2.        组织  白血病细胞
3.        母细胞来源  ATCC
4.        病毒来源 慢病毒
5.        转染方法与标记过程的描述（逆病毒制备、感染与筛选）
1)        感染前消化K562细胞并计数，将细胞铺于T25培养瓶中，确保感染前细胞达到20%-30%的汇合度。
2)        取4ml含慢病毒的培养基，加入40ul 10mg/ml的polybrene混合以0.45um滤膜过滤后加入4T1细胞中。晃匀孔板，37度孵化过夜。
3)        移去含有逆转录病毒的培养基，加入5-8ml完全培养基，37度正常培养12小时。
4)        重复2-3步，2-3个循环后通过流式细胞仪来选择稳定感染的细胞，并通过无限稀释法获得单克隆。
5)        K562-luc细胞系鉴定: 取5×104细胞和1×104细胞，用Passive Lysis裂解液裂解，加入荧光素酶作用底物，将转染质粒的细胞与阴性，阳性对照共同进行单报告基因检测。
6.        培养条件 ：置于37℃、5％CO2培养箱中，用含10％胎牛血清（FBS;    GIBCO）和1％双抗（100 U/ ml青霉素和100 μg/ ml链霉素，GIBCO）的1640培养基培养，培养两天（密度大概80%）按照1：5的比例传代。
7.        细胞传代所需时间：2天/代  
8.        筛选标记维持压力和选择压力：无。
9.        体内实验
尾静脉注射1×107细胞，1周后可见颈部淋巴结转移，5-6周骨髓转移率为100%。