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【求助】组化和western blot结果不一致

发布于 2015-12-03 · 浏览 3343 · IP 北京北京
这个帖子发布于 9 年零 169 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
做一个E3泛素连接酶,开始用Abcam公司一抗做,结果:组化随疾病发展阳性显著增多(肉眼观很明显,没有做半定量)、western blot(实验室常年跑,技术绝对没问题)定量后减少;再让另一研究生做另外一种方法诱导的同一种疾病模型,结果还是组化显著增多(肉眼观)、western blot定量结果减少;接着换用Santa cruz公司一抗,重做两种动物模型,结果仍是:组化显著增多,western blot 定量减少;又再次买Abcam公司一抗(考虑不同批次是否会不一样),再做:结果同前。
目前能找到的原因:目前商品化的该因子抗体都是多克隆,抗体说明书给的是两个条带(均比较亮),我们做wetern blot条带除了说明书上的2条,再靠下的位置还有1条比较亮的条带,如果3个条带面积和灰度值相加的话的确是随疾病进展增多的,和组化结果一致;但目标条带(就一条)定量的,的确是少的。
请大家帮我讨论下这种情况怎么处理。

最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 3343

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