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【求助】原代成纤维细胞提取RNA,纯度不高,求解决方案

最后编辑于 2022-10-09 · IP 广东广东
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这个帖子发布于 9 年零 258 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我是提取RNA新手,提取了5次RNA,结果都令人不满意:得率低;纯度也不好(如下图),求诸位大神,指教指教!
我的RNA提取过程大致如下:
1.心脏原代成纤维贴壁生长于6孔板,细胞密度100%,PBS清洗2遍,加入takara的trizol 1ml/孔,常温摇床5min后,吸取至EP管,存放于-80℃。
2.1 向上述裂解液中加入1/5体积的氯仿。盖紧离心管盖,剧烈震荡15秒,室温静置10min。
2.2 16,000 rcf 4°C 离心15分钟,可见中间白色分层,吸取400 μl上清液。
2.3 小心吸取上层水相至一个新的离心管中,加入等体积的异丙醇。轻柔颠倒混匀后,冰上放置10min。
2.4 16,000 rcf 4°C 离心10分钟。可见沉淀。
2.5 小心弃去上清,晾干至管底剩下3ul液体残留,加入1 ml用DEPC水配制的75%乙醇。充分洗涤管盖和管壁,沉淀漂浮如羽毛状。
2.6 10,000 rcf 4°C 离心6分钟,弃去上清。吸弃壁上残留水珠。
2.7 室温放置2-3min,晾干至管底剩下0.5ul的液体。加入20ul DEPC水,待完全溶解后。
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