（讨论）免疫组化双染之常见问题讨论

因本人也要做双染,因此对此方面的知识比较关注,结果发现网上总结的结果很不一致,特小结如下,欢迎大家指正.
1.概念:在同一张切片上的两种不同抗原的检测,当然这两种抗原可以是同一细胞上,也是可以位于不同细胞上.
2.分类:免疫荧光双重标记，免疫酶双重标记,前一种是用荧光燃料的发光去显示抗原,后一种是用酶底物催化显色.
3.位置要求:(1)假如采用免疫荧光双重标记,无论两种抗原在不同细胞上,还是在同一细胞的相同位置(或不同位置),都是可以做的.(2)假如采用免疫酶双重标记,如果两种抗原在不同细胞上或者同一细胞的不同位置,那也是可以做的,但是位于同一细胞的同一位置(均表达在核或者均表达在浆或者均表达在膜),由于颜色混合（混合本身颜色深度都不一致），不易区分,会导致在相同的部位同时显示两种颜色是非常不理想的.
4.抗体的加入顺序:平行两步法和序贯平行法：前者同时加入两个不同种属的一抗，或者同一种属不同亚型,简而言之，就是两个抗原同时染。后者是分步来染这两个抗原，相对平行两步法来说，最大的优点就是两个一抗可以是同一种属，方便我们购买,在两个一抗为同一种属时,一般中间会加入阻断剂,不会导致交叉反应。此方法通常需要先染比较难以染上的抗原，再染相对容易一点的抗原。
免疫组化双染也困扰我一段时间，希望大家讨论，方便后来人的学习和实验