【求助】骨髓间充质干细胞pellet法培养诱导成软骨

BMSC成软骨诱导分化，目前比较靠谱的似乎就是pellet法培养了，但有几个问题不太明白，希望有经验的前辈指导下：
1，做pellet culure，是不是一般都用15ml的离心管，那每次收集的细胞量需要多少?
2,将15ml离心管放在细胞培养箱里面，要不要盖盖子，不盖的话，不就很容易污染，盖的话，又如何进行气体交换?
3,最终获得pellet那么小，如何提RNA和蛋白那？
4，怎么换液才能避免小球被冲散，多久换液一次？
谢谢啦！