【讨论】??鼠肝微粒体不代谢
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收录时间 2025年5月19日
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发布于 2014-06-17 · 浏览 1012 · IP 黑龙江黑龙江
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鼠肝微粒体不代谢主要考察CYP3A4 求各位前辈指点
我的实验步骤是 向EP管中加入1mg/ml的肝微粒体20微升，20微升的睾酮（500微升里终浓度100umol/L），20微升10mmol/L的氯化镁，80微升磷酸盐，37度预孵育5分钟，加入10mmol/L的NADPH20微升，孵育30分钟，加入280ul的冰乙腈终止反应，并加入内标醋酸可的松20微升。冰上静置后四度离心。
还想问一下 1. 如何使反应体系里的有机溶剂小于1%？ 这个反应体系是指终止反应前，还是终止反应后？
2.底物睾酮储备液10mmol/L 配置1ml 甲醇与水的比例为8：2，然后用纯水稀释成2.5mmo l/L，加20微升进入孵育体系，甲醇的量多不多？
3.内标采用纯甲醇配置有影响吗？
4.肝微粒体是采用低温超速离心法制备的。。。。
5.直接买的是NADPH粉末，用磷酸盐配置是正确的吗？
6.这还没有加药，所加的药物只能用甲醇才能溶解，这样就不能保证孵育体系有机溶剂小于1%，而且将近10%有影响吗？
7.还有如何判断自己的肝微粒体有没有活性呢？
我的实验步骤是 向EP管中加入1mg/ml的肝微粒体20微升，20微升的睾酮（500微升里终浓度100umol/L），20微升10mmol/L的氯化镁，80微升磷酸盐，37度预孵育5分钟，加入10mmol/L的NADPH20微升，孵育30分钟，加入280ul的冰乙腈终止反应，并加入内标醋酸可的松20微升。冰上静置后四度离心。
还想问一下 1. 如何使反应体系里的有机溶剂小于1%？ 这个反应体系是指终止反应前，还是终止反应后？
2.底物睾酮储备液10mmol/L 配置1ml 甲醇与水的比例为8：2，然后用纯水稀释成2.5mmo l/L，加20微升进入孵育体系，甲醇的量多不多？
3.内标采用纯甲醇配置有影响吗？
4.肝微粒体是采用低温超速离心法制备的。。。。
5.直接买的是NADPH粉末，用磷酸盐配置是正确的吗？
6.这还没有加药，所加的药物只能用甲醇才能溶解，这样就不能保证孵育体系有机溶剂小于1%，而且将近10%有影响吗？
7.还有如何判断自己的肝微粒体有没有活性呢？
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1012
