【求助】DiI染脑组织切片的具体实验方法

我们需要用DiI标记神经元细胞膜，观察神经元细胞膜的形态变化。我看了一些文献，大多标记神经元细胞膜的都是用的神经元培养细胞做的实验，我们想做小鼠脑切片DiI染色，不知道有没有人做过脑切片的DiI染色，具体步骤是什么。我还有几个问题需要咨询，希望有经验的大侠给予指导！
1. 脑切片做DiI染色，显示神经元细胞膜效果怎么样？会不会染出来一些胶质细胞的细胞膜干扰观察目标？
2.做脑切片DiI染色，是多聚甲醛固定前染还是固定后染？哪个效果好？如果必须活体染是活体注射还是剥离大脑后染于大脑表面？如果是多聚甲醛固定后染，切片厚度多少，效果怎么样？希望详细步骤里能清楚说明。
3.我看网上说DiI保质期一年，保质期好短，我们实验室的过了保质期了，还能用吗？效果不太好还是基本不能再用了？
因为第一次接触DiI染色，时间紧促，比较着急染色，也希望得到一个漂亮的染色结果，劳烦有经验的你写下详细步骤包括药品的溶解方法使用量使用浓度，顺便解决下我的以上疑问。本人在此不胜感激！