【求助】大提质粒260/280偏低

几次用试剂盒大提质粒，但OD值，即269/280都偏低，这两次都为1.5。我可能是那些操作有问题？急求助与大家！！！（原来我以为是步骤久出问题，把沉淀误吸了；今天早上大提时，师姐帮我吸了两管，我吸一管，但比较后，OD值都是接近1.5）
（1）取小提酶切鉴定正确的小摇菌液100μl入100ml含氨苄青霉素的LB培养基中，37°C，200-250rpm，振摇16h；

(2) 每组取适量保留菌种（此步在超净台内进行），其余菌液提取质粒；

(3) 将菌液倒入50 ml大离心管，离心，富集两次，4°C，10000rpm，10min；

(4) 弃掉上清（倒时要轻，以免细菌沉淀脱落），将离心管倒扣在吸水纸上；

(5) 加入3 ml Cell Resuspnsion Solution，完全重悬菌液；

(6) 加入3 ml Cell Lysis Solution,上下颠倒4 次混匀，菌液立即澄清（若未澄清可静置3-5 min，切勿超过5 min，否则质粒断裂）；

(7) 加入3 ml Neutralization Solution，上下颠倒4 次混匀，静置5 min；

(8) 离心：4°C，14000 rpm，15 min，如沉淀附着不牢固，再以同样条件离心一次；

(9) 吸取上清，转入另一无菌离心管（勿吸入白色沉淀）；

(10) 加10 ml完全混匀树脂（DNA Purification Resin），上下颠倒3次，静置2 min或更长时间；

(11) 将上述混合物转入midicolum，真空负压抽吸，先倒15 ml左右，不断加入直至混合物全部通过；

(12) 待混合物全部通过，冒小气泡时加15 ml Column Washing Solution，同样条件抽吸，抽完后加15 ml Column Washing Solution，再洗一次；

(13) 剪下midicolum（口上覆以酒精消毒的一小块封口膜，直至实验结束，分装至EP管内-20?C保存），放于无菌EP管中（将EP管盖剪去）离心，12000 rpm，2 min，以除去midicolum中残留的Column Washing Solution；

(14) 将midicolum放于另一无菌EP管中，加100 μl预热（70°C）无菌去离子水，放入60°C孵育2-3 min（可适当延长时间），离心12000 rpm，2 min，收集第一批质粒；

(15) 再将midicolum放于另一无菌EP管中，加100 μl预热（70°C）无菌去离子水，放入60?C孵育2-3 min（可适当延长时间），离心12000 rpm，2 min，收集第二批质粒；

(16) 亦可再将midicolum放于另一无菌EP管中，加100 μl预热（70?C）无菌去离子水，放入60?C孵育2-3 min（可适当延长时间）,离心12000 rpm，2 min，收集第三批质粒；

(17) 将收集的各管样品，离心12000 rpm，5 min，以去除残余树脂；

(18) 测质粒浓度，所得质粒-20?C保存。用于后续的基因转染。