【原创】实践出真知，HepG2 (ATCC HB-8065) 培养心得

ATCC推荐的培养基是EMEM+10% FBS，文献中的培养条件五花八门，EMEM, DMDM/F-12, RPMI等等不一而足。实验室长期培养HEK293细胞采购了大量的DMEM。仔细分析EMEM的成分后发现和DMEM相比大部分成分的含量更低，只是多了几种非必须氨基酸。于是确定培养条件为高糖DMEM+9% FBS+1xNEAA (Gibco 11140-50)。培养结果非常理想。初期培养时为了防止细菌污染用了普通浓度的青-链，传代5次之后停用，细胞生长速度和形态未见有任何变化。

HepG2的特征是堆叠生长，培养瓶表面肉眼可见针尖大小的的白色细胞团，镜下观察细胞可见边缘明显的细胞团块。目测密度越70-80%时其实已经长满，培养基明显变黄，换液后细胞覆盖面积也不再增加。传代用胰酶消化5-10分钟，细胞变圆之后拍打培养瓶3次，目测大部分细胞脱离后加入培养基终止消化后适度吹打。部分大细胞团无法打散不用管它，细胞悬液静置三分钟后自然会沉到底部，此时吸取上层得到的就是单细胞悬液了。如果需要保持细胞形态，传代稀释比例建议在1:3-1:5之间。如果实验需要得到单层细胞，可以用明胶（0.1%, 纯水配置，高压消毒）包被培养瓶，但是这种状态下细胞的极化特征消失，可能对结果有一定影响，需要特别注意。

附两张HepG2在两种不同形态下长满的图片供大家参考。