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【求助】percoll分离小鼠肝脏淋巴细胞

乳腺外科医师 · 最后编辑于 2011-09-19 · IP 湖北湖北
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这个帖子发布于 13 年零 305 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
如题,用percoll分离小鼠肝脏淋巴细胞,我是按这个步骤来的:
肝脏淋巴细胞分离:将肝脏置玻璃平皿,冰上剪碎至约1mm3大小,过200目不锈钢钢网,用注射器内芯轻轻研磨,同时加入含10%胎牛血清(FBS)的PRIM 1640培养液冲洗,滤液约45ml转入50ml离心管中,500r/min 4℃离心3min,吸取上清液转入另一50ml离心管中,1500r/min离心10min,弃上清液,沉淀用3ml 40% Percoll分离液重悬,缓慢加至3ml 70% Percoll分离液上,2400r/min离心20min,从70%与40% Percoll分离液分界面上吸取肝脏淋巴细胞,然后用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤细胞,重悬,锥虫蓝染色,细胞计数。
但是在2400rpm离心后,70%与40% Percoll分离液分界面处是红色的一层,不能确定那是不是淋巴细胞层。最后怎么确定是不是取的淋巴细胞?求助高手,最好是有个图能让我看看到底是取哪一层。谢谢!!

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