【进展|热点】呼吸道病毒感染诊断进展

呼吸道病毒感染嚴重影響著人類的健康。世界範圍內，主要由呼吸道病毒感染引起的急性呼吸道疾病在兒童及成人中非常普遍。由於呼吸道病毒感染後的臨床表現症狀與其他病毒感染後的症狀不能區分，與細菌感染引起的臨床症狀也很相似，因此，經常造成抗生素的濫用。此外，下呼吸道感染的病人經常需要住院治療（靜脈注射抗生素、對症治療或支持治療）。雖然目前只有抗流感病毒的特異性藥物，但呼吸道病毒感染的病原診斷已愈來愈成為病人治療所必需，而特異的呼吸道病毒的診斷對於瞭解病情、干預治療以及阻斷病毒傳播都有幫助。快速的診斷有利於阻止抗生素的濫用、降低一些不必要的檢查費用、以及縮短住院時間等。美國德克薩斯大學醫學部的Michael Loeffelholz 等人就目前呼吸道病毒實驗室診斷的研究進展作如下綜述：首先在標本採集方面，棉簽類型的創新，如植絨拭子的使用，可能是病毒檢測中最重要的一大進展。植絨拭子主要是由垂直於軸拭子的尼龍纖維組成，不像無紡布黏膠拭子不容易釋放標本，它的纖維能像刷子一樣收集呼吸道上皮細胞，並能夠高效地將細胞釋放到運輸溶液中。由於現代
診斷技術和植絨拭子的使用，拭子標本似乎比鼻咽吸出物和洗液更適合於病毒分離和抗原檢測。病人或其父母收集的拭子與醫務工作者收集的拭子在PCR 檢測中的靈敏度差異不大，而且病毒RNA 在乾燥的拭子上是穩定的。其次， 在實驗室診斷方面，診斷技術有抗原檢測、病毒分離、血清學實驗以及核酸擴增。1） 抗原檢測包括快速免疫實驗和直接免疫螢光檢測（DFA）。快速免疫有酶免疫、測流層析和光學免疫，因其可以在30 分鐘內出結果，被廣泛用於流感病毒和呼吸道合胞病毒（RSV）的檢測。但快速免疫對變異較快的病毒的靈敏度較低，限制了它的使用。直接免疫螢光（DFA） 的靈敏度高於快速免疫，但它的高度特異性依賴于經驗豐富的技術員。一直以來，商業化的DFA 試劑只能檢測A 和B 型流感、RSV、副流感病毒1-3 和腺病毒，但最近FDA 批准了偏肺病毒的商業化DFA 試劑。2） 病毒分離一直是呼吸道病毒檢測的金標準，但傳統的在試管中後進行細胞培養病毒的週期長不適用於臨床，但利用飛片技術（shellvial） 培養和在同一小瓶中混合多種細胞系可以大大縮短培養週期至24~48h，同時簡化工作流程。3） 血清學診斷的最新進展就是微凝集試驗，它是利用工程報告病毒（一種能夠表達血凝蛋白的假型慢病毒載體）進行A 型流感病毒不同亞型的抗體滴度的檢測。微凝集試驗主要用於回顧性研究、流行性調查、疫苗試驗，因而限
制了其在常規診斷中的應用。4）RT-PCR 和核酸擴增（NASBA）已廣泛用於呼吸道病毒的檢測。即時PCR 在呼吸道病毒的檢測中是最敏感的，但由於其發射通道數目有限，限制了其在多重PCR 中的應用，一次最多做4 個靶基因（包括一個內參），而常規PCR 可在一管中同時擴增多種病原。FDA 批准的利用RT-PCR 和序列特異的微磁珠的一項檢測，可同時檢測A 和B型流感病毒、副流感病毒1-3、人偏肺病毒、鼻病毒和腺病毒。分子擴增的高靈敏度使得無臨床症狀的標本中也能檢測到呼吸道病毒核酸，甚至在一份標本中檢測到多種病毒，這些資料的臨床意義以及新發病毒的致病性還需進一步的研究。目前和未來的診斷方法主要還是基於抗原、分子和細胞培養。未來呼吸道病毒診斷的研究應致力於準確快速的檢測具有重要臨床意義的一系列病毒，便於在合理成本下對病人干預治療和實施措施控制感染。
Int J Microbiol. 2010;2010:126049. Epub 2010 Oct 19.

Advances in diagnosis of respiratory virus infections.
Loeffelholz M, Chonmaitree T.

Department of Pathology, The University of Texas Medical Branch, 301 University Boulevard, Galveston, TX 77555-0740, USA.