【求助】PCR产物加A
发布于 2010-09-11 · 浏览 9171 · IP 天津天津
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各位大侠 我的PCR产物是平端的（pfu酶扩增产物），现在要加A连接入T载体，我连了两次了 测序结果都是空载体，郁闷死了！
看论坛里大家都推荐用dATP加A，但我们导师觉得用dNTP也可以，我的加A体系是这样的：
dNTP(2.5mM each) 1ul
Taq E 10单位 0.4ul
10*taq buffer 1ul
pcr产物（纯化后）7ul
加灭菌超纯水至 10ul
72°反应30min后，按照T载体说明书操作16°连接30min后 直接做转化，克隆长得挺好，但测序结果都是阴性的，***解答！！
看论坛里大家都推荐用dATP加A，但我们导师觉得用dNTP也可以，我的加A体系是这样的：
dNTP(2.5mM each) 1ul
Taq E 10单位 0.4ul
10*taq buffer 1ul
pcr产物（纯化后）7ul
加灭菌超纯水至 10ul
72°反应30min后，按照T载体说明书操作16°连接30min后 直接做转化，克隆长得挺好，但测序结果都是阴性的，***解答！！
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 9171
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