【求助】被3T3-L1细胞诱导分化折磨得快疯了，求助于大家！

小弟折腾3T3-L1细胞向脂肪细胞分化已经3个月了，不知道什么原因诱导分化的成功率很低，在这里把详细步骤发出来大家看看，希望能有过来人指点一下！

1、细胞接种于12孔板，每孔约3×104个，整个孔含1ml 10% FCS 的高糖DMEM，2天后，细胞融合；待3T3-L1细胞融合后2天，以经典的“鸡尾酒”方法进行诱导，IBMX 0.5μM，DEX 1mM，INS 10μg/ml；2天后更换为只含INS 10μg/ml在作用2天；以后用含10% FCS 的高糖DMEM继续培养，隔天换液。文献报道从诱导第6-8天开始，出现脂滴。而我的脂滴约12天后才能少量出现，到15天左右脂滴就不再增多，每孔<50%。

2、IBMX是用DMSO溶解的，分装后放于-20，长期使用，每块培养板用时取1EP管，没用反复冻融；
DEX用乙醇溶解的，避光置于4°，1月内有效；
INS按每1mg INS粉溶于含1微升冰醋酸的纯水中1ml中，配后过滤，置于4°，长期使用。

有几个问题：
1、诱导时的“接触抑制”两天，具体概念我不是很明白。请教过一位过来人，说只要细胞不卷边，越满越好，是这样吗？我担心所加的药物不足以作用于所有细胞，又担心细胞没有接触抑制影响分化效果。尝试过加大整个诱导剂的体积，但是这样使细胞四周全部卷边，集中在中间，故还是按照12孔板每孔1ml的体系进行，不知对否？

2、我理解IBMX的作用是停止增殖，促进分化；DEX是促进分化；INS是引导细胞向脂肪细胞分化。那么，在细胞已经不增殖的情况下，是否可以延长INS的作用时间呢？