【求助】新手求助！菌落PCR问题

各位大侠请留步，求拯救!本人新手，遇到问题无法解决啊，请各位不吝赐教
我将一段目的基因(变异区)热击转化克隆后，挑单菌落进行菌落PCR，有目的条带的出现。（见图一）

后来为提高转化效率，进行电击转化，效率是提高了，但挑单菌落进行菌落PCR的时候出现了问题。除了marker和阳性对照跑出了条带，其他菌落都没有出来，且有些点样孔亮度有点不正常，点样孔亮的，非特异性扩增也多。多次重复，结果都一样。（见图二）最后一个泳道为阳性对照。

由于本人有事耽搁，实验暂停了半个月，平板内菌落大变样（见图三、图四).

我按菌落颜色不同又做了一次菌落PCR，但问题是，竟然连阳性都跑不出来！！！而且菌落点样孔还是亮。(见图五) 按泳道从左至右：marker、阳性、白菌1、白菌2、淡黄菌、透明菌、蓝菌、阴性。

重复了一次，情况一样，阳性都没有出来。
老师说我PCR有问题，让我自己找。我找不到啊。以前有带出来，表明PCR程序没有出问题，那就是说我操作出问题了么？还是别的那个地方出问题了？我实在是不知道问题在哪里。求各位帮帮忙~我接下来到底要怎么做啊？谢谢~~~