请教用southern blot鉴定转染基因时遇到的一些问题

　　实验目的是从转染细胞的genome鉴定转染基因，我用的kit是Roche的DIG high prime DNA labeling and Detection starter kit 1,现在做过两次，第一次是阳性对照（质粒）做出来了，但是基因组上没见到特异的带．第二次我从转染细胞的基因组做ＰＣＲ得到了一条带，再做southern blot ，ＰＣＲ产物鉴定出来了　，但基因组上还是没有见到特异的带．
　　我想请教一下，要想从基因组上鉴定出来，需要多少genome DNA,说明书上提到需ug级．如果我加大基因组的量，最后酶切后的体系又太大了，加样孔上不进去（我已经把胶铺到最厚了），怎样能同时加大genome DNA的量，又使其在酶切后体积不加大．我感觉要是基因组太浓了，酶会切不开．
　　同时想请教用这种方法鉴定过genome 中单拷贝或是拷贝数较低的基因，灵敏度是不是不够．
　　还有，如果阳性对照成立，可不可以说杂交体系没有问题，我的杂交温度是４２度．
　　最后，我感觉背景有一些高，是ＥＢ导致的吗，怎样降低？
　　非常感谢！