【原创】原代胶质细胞培养（小胶质、星形胶质）

我看到本版求助原代细胞的帖子有几个，回答的好像没有详细的，故把前段时间做的实验步骤拿上来分享一下~
材料：24 h新生SD大鼠2只（可视情况变化），灭菌手术器械（刀片，剪刀，镊子），小培养皿，75 cm²培养瓶1个，离心管，移液管若干，多聚赖氨酸溶液（PLL,过滤），Gibco DMEM, 培养液（DMEM+10% FBS+1%双抗+1%谷氨酰胺）
步骤：（超净台操作）
1. 酒精棉球擦拭新生大鼠头部后，剪下；剪开头皮，用刀片划开颅骨，使用镊子夹取皮层
2. 将新鲜皮层放于盛DMEM的小培养皿中，剥去表面脑膜及血管（否则影响消化）
3. 剪碎皮层，将其转移入胰酶消化液（含0.1%DNA酶），置于37℃消化4 min,过程中可以吹打一次助消化
4. 待组织碎片发粘后，转移入离心管中，加3倍于消化液体积的培养液，离心1500 rpm 5 min
5. 弃上清，加入培养液吹打。
6. 将悬浮细胞转移至事先包被了PLL的培养瓶中（PLL包被0.5 h），轻摇匀后置于培养箱中。
7. 第2天更换培养液：将瓶中旧液轻轻倒掉，勿晃勿洗。
8. 继续培养数天，中间观察到培养液若发黄即换
9. 培养一周后，置摇床以200 rpm摇4 h后，取培养液于离心管中，2000 rpm 离心5 min，弃上清，加入培养液2-4 ml，吹打混匀，即得小胶质细胞，可计数进行后续实验
10. 原培养瓶中所剩细胞即为星形胶质细胞，胰酶消化后即可进行后续实验。
备注：1.实验中注意勿要污染
2.虽然不排除有少突胶质细胞，但实验证明操作所得细胞纯度符合要求
3.经验证，原培养瓶若加入培养液后不做处理，继续培养，过一段时间仍可摇下小胶质细胞
下面是刚种板不到24h的小胶质样子，时间再久一点会长得更好